您好，我想問一下熒光定量PCR產物的溶解曲線中Tm值在92度

1樓：匿名使用者

這個是可以的。根據擴增產物gc含量的不同，tm有可能很高。只要解離曲線有一個很銳的峰，就沒有問題。我以前為了提高特異性，專門設計過高tm值的引物。

您好，我想問一下熒光定量pcr產物的溶解曲線的tm值在92度可以嗎？是不是在86-88度之間最好？謝謝

2樓：匿名使用者

這個不是絕對的，只是大多數rt-pcr產物的tm值會落在那個範圍內，有些目的片段很長的產物有可能會稍微大一點。這跟目的片段長度有關係。主要看產物是否為單一峰，是否有雜峰。

3樓：匿名使用者

92度時，dna雙鏈都接近變性溫度了呀。

tm值常在60～70度左右，可以通過熔接曲線看出來。

您好，我想問一下，熒光定量pcr的引物跨2個內含子可以嗎？因為我的基因的外顯子特別小！謝謝

4樓：

可以呀，跨內含子的引物還好一些呢。。。

5樓：滄海一粟

當然可以了，所跨內含子與pcr產物長度相差越大越好。

6樓：匿名使用者

可以啊，這沒什麼問題

熒光定量pcr熔解曲線的tm值不一致，峰值所在溫度不一，這是怎麼回事啊

7樓：清晨在雲端

熒光來，又作「螢光」，是自指一種光致發光bai的冷發光現象。當某種常溫du物質經某種波長的入射zhi光（通常是紫外線或daox射線）照射，吸收光能後進入激發態，並且立即退激發併發出比入射光的波長長的出射光（通常波長在可見光波段）；很多熒光物質一旦停止入射光，發光現象也隨之立即消失。

熒光定量pcrtm值代表啥意思

8樓：滿意請採納喲

tm值和溶解曲線是為了檢測pcr反應特異性的，

主峰前的一個小峰可能是非特異性擴增，

也可能是引物二聚體，可以降低引物濃度試試

老師，您好，有些問題想諮詢您，我不太明白實時熒光定量pcr溶解曲線的tm值是儀器自動給出的嗎，

9樓：有能註冊的名嗎

較好的溶解曲線應該只有目的片段單一的峰，如果在目的片段靠前的位置有小峰，可能是引物二聚體汙染，為什麼你的曲線什麼峰都沒有呢？

熒光染料定量pcr熔解曲線tm值過高對結果有什麼影響

10樓：誰說我不好哎

用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber green分子結合的pcr產物

隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。

曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化！開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的，接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。

如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。

實時pcr產物的tm值為什麼一般是在80以上

11樓：南京金益柏生物科技****

pcr的退火溫度是引物與模板之間的，而real time pcr最後的退火溫度是產物之間的。產物的tm值，指的是pcr產物解鏈一半時的溫度。一般realtime pcr 的產物大多在70-200bp之間。

當然退火溫度會在80以上了。

熒光定量pcr繪製溶解曲線應該從多少度開始？

12樓：

實時pcr產物的tm值大小一般會在80°上下，所以溶解曲線不必從40°開始，可以從65°開始進行溶解曲線繪製，另外在產物之前出現的小峰，同時也在陰性對照中出現了，應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。