1樓：北京索萊寶科技****
一、mtt比色：
mtt比色是一種目前被廣泛採用的檢測細胞生長和存活的方法，其原理是外源性mtt（四唑鹽）可被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成難溶的藍紫色結晶物並沉澱在細胞中，而死細胞無此功能，dmso（二甲基亞碸）能溶解細胞中的紫色結晶物，用酶聯檢測儀在490nm波長處檢測其光密度值，可間接反映活細胞數量。在一定範圍內，mtt結晶物形成的量與細胞數成正比，此方法已廣泛用於檢測細胞活力、觀察細胞生長等方面，具有靈敏度高、重複性好、操作簡便、經濟、快速、易自動化、無放射性汙染等特點，與細胞計數有良好的相關性。
二、rdu標記法
1．細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中（內放置一蓋玻片），培養1天，用含0.4％ fcs培養液同步化3天，使絕大多數細胞處於g0期。
2．終止細胞培養前，加入brdu（終濃度為30μg/l），37℃，孵育40min。
3．棄培養液，玻片用pbs洗滌3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．經固定的玻片空氣乾燥，0.3％h2o2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封閉。
7．甲醯胺100℃，5min變性核酸。
8．冰浴冷卻後pbs洗滌，加1抗即抗小鼠brdu單抗（工作濃度1：50），陰性對照加pbs或血清。
9．按abc法進行檢測，蘇木素或伊紅襯染，在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及brdu陽性細胞數，計算標記指數（li）。
三、結晶紫法
1．體外細胞培養結束後，去培養液，加入11％的戊二醛固定，置於振盪器上搖20min。
2．固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗淨。
3．置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。
4．加入0.1％的結晶紫液對細胞染色，振搖30min。
5．用蒸餾水洗滌，至多餘的結晶紫液沖洗乾淨。
6．置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。
7．加入10％的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。
8．1h後在酶標儀上測定光吸收度，波長595nm。
四、酸性磷酸酶法
1．96孔細胞培養板中培養細胞，去培養液。用0.01mol/l pbs洗滌1次（如為懸浮細胞則用離心洗滌）。
2．去洗滌液後加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/l氫氧化鈉10μl/孔。
5．在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度，將細胞培養板其中不含細胞，同樣處理過的一孔作為空白對照，所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標準對照，以細胞數為x軸，光吸收度為y軸，可作直線迴歸，可推算出每孔中的細胞。
如何用western blot方法從細胞培養上清中檢測目的蛋白
2樓：
western blot中蛋白樣品調節濃度有很多方法 先檢測出各個蛋白樣品的濃度，根據體積通過不同單位的loading buffer將樣品稀釋成不同的體積，即可以保證各個蛋白樣品濃度一致 或者在樣品裂解的時候，用裂解液或者pbs去稀釋蛋白樣品，達到調節濃度的。
檢測體外細胞毒性時，什麼時候用浸提原液，什麼時候用稀釋液
3樓：依依依依i億
一般都是把敷料浸於細胞培養液中，再放置在培養箱中。經過既定時間後測量培養液中的化學成分是否出現具有統計意義的變化/是否有細胞形態或者數量變化。以不含敷料的培養液單獨培養作為對照組。
比較煩人的問題是敷料本身的其他成分會不會影響試驗結果。
要不你搜搜看具體試驗？比如含銀敷料對成纖維細胞毒性的體外試驗之類的（燒傷、糖尿病足潰瘍神馬的）
細胞培養液中蛋白用elisa怎麼檢測
4樓：人蔘__苦短
是細胞分泌的蛋白的話，直接在培養皿中鋪入一定量的細胞，培養3天，細胞達到80-90%時，加藥的時候換無血清培養基，作用完後收集細胞培養上清液，3000rpm,4℃ 離心10min，取上清液。elisa檢測時，不同因子的稀釋度，要事先做個預實驗確定。對照組為新鮮培養液。
5樓：南京金益柏生物科技****
一般來說檢測細胞內的蛋白質需要破碎細胞，非結構蛋白較易提取，破碎細胞後離心取上清即可。而結構性蛋白則需破碎脂膜提取蛋白，具體方法可參照膜蛋白提取的相關文獻。提取的總蛋白需定量，然後以每mg或g的蛋白的相同濃度稀釋後用於測定。
提取時注意要保持低溫及加入必要蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)。
如何收集細胞上清做elisa
6樓：匿名使用者
是培養基，但也有細胞分泌的可溶性的蛋白。所以一般大家都是需要離心的，去掉一些大分子的雜質之後再做elisa的。 elisa檢測細胞上清液總細胞因子的處理實驗步驟：
1、取細胞培養上清液500ul； 2、4度，6000rpm離心5－10min； 3、取上清。是細胞分泌的蛋白的話，直接在培養皿中鋪入一定量的細胞，培養3天，細胞達到80-90%時，收取細胞培養上清液，離心去除沉澱，取上清測定濃度，用於elisa檢測。對照組為新鮮培養液。
elisa檢測細胞培養上清樣本要求 要無菌操作嗎
有用細胞培養液的上清做western的嗎
7樓：匿名使用者
沒有影響,最後讀值時的吸收值和你細胞培養液顏色又不是一個步驟
細胞培養液上清和血液中的細胞因子有區別嗎
8樓：我哩歲月
有區別。細胞培養液是一種含有細胞分泌蛋白和死細胞的細胞培養液，而細胞因子是免疫反應、造血和炎症反應產生和維持所必需的蛋白質類物質。
怎樣提取上清液用westernblot測定上清液中細胞分
western blot中蛋白bai樣品調節濃度有很多du方法 先檢測出各個蛋zhi白樣品的濃度，根據dao體積通過不同專單屬位的loading buffer將樣品稀釋成不同的體積，即可以保證各個蛋白樣品濃度一致 或者在樣品裂解的時候，用裂解液或者pbs去稀釋蛋白樣品，達到調節濃度的。這個還是bai...
陌陌用培養液升級的土地有期限嗎
默默用培養液升級的土地有期限嗎？那肯定有期限到，老一定時間你還是要升級的，升級了就可以呀。用培養液升級的土地，我覺得應該也是有期限的吧，不可能一直的這樣下去。默默用培養液升級的土地不是有期限的。升級了的土地，它就是可以直接升級了。陌陌這個培養液中有土地之刃那個農場，把那陌陌農場還種各種各樣的東西，對...
洗眼液怎麼使用了洗眼液怎麼用
洗眼要適當.洗眼液與滴眼液不同.一般都會配有相應 的眼杯,把洗眼液倒在符合眼眶設計的眼杯內清潔雙眼 洗眼液的使用方法為 1 開啟瓶蓋，倒出5 10ml洗眼液於矽膠杯中。2 矽膠杯高側邊與外眼角對齊，低頭，矽膠杯扣住眼部。3 仰頭，眨動眼睛，使洗眼液完全浸潤，清洗20秒。然後低頭取下矽膠杯，用紙巾拭乾...