1樓：廣州源井生物
grna和cas9質粒或病毒轉導細胞後藥篩；藥篩完畢後，方法一：通過pcr和測序方法，若測序後出現多出套峰，那麼證明grna活性；方法二：通過t7e1酶法檢測grna活性。
crispr/cas9基因敲除，敲入怎麼做，原理
2樓：泉州指南針生物
crispr/cas9可謂是目前基因編輯領域最熱門的明星工具，從2023年張鋒教授結合crispr技術和二代測序技術開發了對人類全基因組的crispr敲除文庫，並在腫瘤細胞繫上利用該文庫進行了抗藥基因的篩選。在獲得陽性基因的基礎上獲得了新的抗性基因，發表在了science雜誌上。到目前，中國在crispr領域的研究處於世界領先水平，國家基因的申報中頻發出現crispr/cas9技術的應用，含有這項技術的文章也更容易發表高分文章。
crispr/cas9 基因敲除動物模型怎麼做
crispr/cas9的原理
3樓：
此係統的工作原理是 crrna（ crispr-derived rna ）通過鹼基配對與 tracrrna （trans-activating rna ）結合形成 tracrrna/crrna 複合物，此版複合物引導核酸權酶 cas9 蛋白在與 crrna 配對的序列靶位點剪下雙鏈 dna。而通過人工設計這兩種 rna，可以改造形成具有引導作用的sgrna （singleguide rna ），足以引導 cas9 對 dna 的定點切割。
作為一種 rna 導向的 dsdna 結合蛋白，cas9 效應物核酸酶是已知的第一個統一因子（unifying factor），能夠共定位 rna、dna 和蛋白，從而擁有巨大的改造潛力。將蛋白與無核酸酶的 cas9（ cas9 nuclease-null）融合，並表達適當的 sgrna ，可靶定任何 dsdna 序列，而 sgrna 的末端可連線到目標dna，不影響 cas9 的結合。因此，cas9 能在任何 dsdna 序列處帶來任何融合蛋白及 rna，這為生物體的研究和改造帶來巨大潛力。
4樓：花瓣八卦
不到2分鐘，讓你認識crispr-cas9基因編輯技術的原理，太先進了！