哺乳動物細胞能提撒多少,一個哺乳動物細胞能提取出多少rna

2022-02-18 13:57:50 字數 3671 閱讀 8152

1樓:匿名使用者

用trizol來提取細胞總rna的話,一個6孔板的細胞足夠了。對於貼壁培養的細胞,可將培養基吸出後直接向培養板中加入trizol來溶解細胞,然後分次移出細胞裂解物進行後續操作即可。值得注意的是,對於所加trizol的量,是依據培養板的面積而不是依據細胞的數量來決定用量的(一般每10cm2加1 ml)。

當trizol量不足時可導致抽提的rna中汙染有dna。

另外,在trizol的使用說明中的注意事項提及,如果細胞量太少(100~10000個細胞),可加入800 ul的trizol,後續裂解、加氯仿按常規操作。在用異丙醇沉澱rna前加入5-10 ug無rna酶的糖原作為水相的載體。其會保留在水相,與rna共沉澱,且不影響後續的逆轉錄及pcr反應。

2樓:匿名使用者

這一從培養的單層哺乳動物細胞中分離 rna

3樓:小乖乖小鬧鬧

對於貼壁培養的細胞,可將培養基吸出後直接向培養板中加入trizol來溶解細胞,然後分次移出細胞裂解物進行後續操作即可,一般個人習慣用biog提取

rna干擾技術和反義核酸技術哪個的基因沉默

做轉錄組,組織樣本和細胞樣本哪個更好

rna的干擾原理

4樓:丕龍兄

1、病毒基因

、人工轉入基因、轉座子等外源性基因隨機整合到宿主細胞基因組內,並回利用宿主細答胞進行轉錄時,常產生一些dsrna。至於dsrna的產生機制我也沒搞懂。

2、宿主細胞對這些異樣的dsrna產生反應,核酸內切酶dicer將dsrna切割成多個具有特定長度和結構的小片段rna(大約21~23 bp),即sirna。

3、sirna在細胞內rna解旋酶的作用下解鏈成正義鏈和反義鏈,反義sirna再與體內一些酶(包括內切酶、外切酶、解旋酶等)結合形成rna誘導的沉默複合物(rna-induced silencing complex,risc)。

4、risc與外源性基因表達的mrna的同源區進行特異性結合,risc具有核酸酶的功能,在結合部位的兩端切割mrna,使mrna降解。

5、sirna還可作為引物與mrna結合併在rna聚合酶(rna-dependent rna polymerase,rdrp)作用下合成更多新的dsrna,新合成的dsrna再由dicer切割產生大量的次級sirna,從而使rnai的作用進一步放大,最終將靶mrna完全降解。

6、達到基因沉默的目的。

回答完畢。

5樓:匿名使用者

rna干擾(rnai)指的是,將與mrna對應的正義rna和反義rna組成的雙鏈rna(dsrna)匯入細胞,可以使mrna發生特異性的降解,導致其相應的基因沉默的現象。

6樓:匿名使用者

細胞由於進化的機理,有一套降解雙鏈rna的酶系統(抗病毒感染)。

rnai就是利用這一專系統,人工引屬入一段和目標rna互補的序列,這樣,在細胞內形成雙鏈rna,誘發降解機制。使目標rna降解,無法被進一步翻譯了。

7樓:匿名使用者

問的不具體

應該都是干擾其合成。

提取細胞rna一個培養皿加多少trizol

8樓:北京索萊寶科技****

(僅供參考)1ml就可以了,細胞的rna提取比較容易,只要你提取過程能夠保證不汙染,rna一般不會降解,質量也應該不錯。如果要使濃度高一點,你可以稀釋的時候少加點depc水,我不知道你是多少水稀釋的,可以減少一下。

9樓:匡雅霜

從12孔板到6cm dish,我都加1ml trizol。

其餘多少可酌情增減。trizol的說明書上有按細胞量多少來加的,你要求高的話自己仔細看看。

rna提取原理

10樓:追尋複製者

rna抽取一般使用trizol法抽來提:

trizol是一種總自rna抽提試劑,內含異bai硫氰酸胍等物質,能du

迅速裂解細zhi胞,抑制細胞釋

dao放出的核酸酶活性。目前常用trizol法進行提取組織或細胞中的rna。

trizol作用原理:

在勻質化或溶解樣品中,trizol試劑可保持rna的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心後,裂解液分層成水相和有機相。rna存在於水相中。

水相轉移後,rna通過異丙醇沉澱**。移去水相後,用乙醇可從中間相沉澱得到dna,加入異丙醇沉澱可從有機相得到蛋白質。

11樓:匿名使用者

dna不是單獨存在於細胞中的,是染色體

蛋白質是有機物沒錯,但是它是複雜的有機物,有親水基,疏水基,所以不是只要是有機物就溶於有機溶劑的

分層看的是密度,不是分子量的大小

12樓:《不能說的祕密

蛋白質在有機溶劑中復變性所以形成

制沉澱,中間那白bai色的是變性du的蛋白質。

我們做過zhi提取dna的實驗,dao用的是飽和酚提取的,後來又用了氯仿的。dna、rna很容易被分解,特別是rna,rna酶到處都有,我們在做dna提取時用到edta抑制dna酶的活性,防止被降解。

分層不是看分子的大小的,看它在離心力的作用下運動的快慢,一般密度大的運動的快一些在下面。

下層有機相中有一些脂類

trizol裂解細胞後可以按照rna提取試劑盒提取嗎

13樓:名傑**

總rna提取試劑盒(trizol法)

ripure試劑是直接從細胞或組織中提取總rna的試劑。它在破碎和溶解細胞時能保持rna的完整性。加入氯仿後離心,樣品分成水樣層和有機層。

rna存在於水樣層中。收集上面的的水樣層後,rna可以通過異丙醇沉澱來還原。在除去水樣層後,樣品中的dna和蛋白也能相繼以沉澱的方式還原。

乙醇沉澱能析出中間層的dna,在有機層中加入異丙醇能沉澱出蛋白。共純化dna對於樣品間標準化rna的產量十分有用。

無論是人、動物、植物還是細菌組織,該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。tripure試劑操作上的簡單性允許同時處理多個的樣品。所有的操作可以在一小時內完成。

tripure抽提的總rna能夠避免dna和蛋白的汙染。故而能夠作rna印跡分析、斑點雜交、poly(a)+選擇、體外翻譯、rna酶保護分析和分子克隆。如果是用於pcr,當兩條引物位於單一外顯子內時,建議用擴增級的dnase i來處理抽提的總rna。

tripure試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種rna的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的rna瓊脂糖凝膠電泳並用溴化乙啶染色,可見許多介於7 kb和15 kb之間不連續的高分子量條帶(mrna和hnrna成分),兩條優勢核糖體~5 kb (28s)和~2 kb(18s),低分子量rna介於0.1和0.

3 kb之間 (trna, 5s)。當抽提的rna用te稀釋時其a260/a280比值≥1.8。

適用範圍:

適用於各種動植物組織/細胞總rna、dna、蛋白的快速抽提用杭州昊鑫生物的

14樓:匿名使用者

先加rna抑制劑,然後冰上提取,操作儘量快。

這個公司,武漢勤致傑生物,我用了。根本提不出來,全降解了,付錢之前騙人說多好用,售後的時候態度超級差,毀我樣本,給我氣收。

老鼠是不是哺乳動物,老鼠是哺乳動物嗎

哺乳動物的主要特徵是 1 身體表面有毛,一般分頭 頸 軀幹 四肢和尾五個部分 2 用肺呼吸 3 體溫恆定,是恆溫動物 4 腦較大而發達 5 哺乳 6 胎生。老鼠是動物界,脊索動物門,脊椎動物亞門,哺乳綱,齧齒目的哺乳動物。老鼠是哺乳動物嗎?老鼠的繁殖方式是胎生,是哺乳動物中繁殖最快 生存能力很強的動...

動物細胞與植物細胞的區別,是動物細胞還是植物細胞

一 最明顯的 必然的區別 有無細胞壁 二 成熟 的植物細胞一般有大液泡 注意是 大 液泡 三 高等植物的很多細胞 葉片中的柵欄組織 海綿組織 某些莖和果皮的表皮細胞 綠色 見光部位 中有葉綠體 某些低等動物細胞也有 動物一般沒有 四 高等動物細胞一般有中心體 某些低等植物細胞也有 植物一般沒有 三四...

動物細胞具有全能性嗎,動物細胞和植物細胞都具有全能性嗎? 這兩者有什麼區別呢?

植物的細胞具有全bai 能性du,這句話相對動物細zhi 胞來說,包括兩dao層意思 一是細胞核心具有全容能性,二是細胞質具有全能性。但植物細胞的細胞質具有全能性,有什麼例子,難道沒有細胞核的植物細胞也能發育成一個完整個體?否則植物細胞的全能性與動物細胞的全能性一樣,只不過更容易表現出來而已。即動物...