1樓：秋雨無聲染霜林
你好，你說的用酶消化法的人工純化吧，
酶消化法是比較常用的純化方法,不僅對貼壁細胞可行,能利用上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同,是兩者分開,達到純化的目的；另外對貼壁細胞與半貼壁細胞及黏附細胞間的分離純化也是十分有效的.
（1）上皮細胞與成纖維細胞的分離純化：
兩者在胰蛋白酶的作用下,由於成纖維細胞先脫壁,二上皮細胞要消化相當長的時間才脫壁,特別是在原代細胞初次傳代和早期傳代中兩種差別尤為明顯,故可採用多次差別消化方法將上皮細胞和成纖維細胞分開,方法步驟如下.
採用常規消化傳代方式將0.25%胰蛋白酶注入培養瓶內兩次,每次加1ml（25ml培養瓶）,來回輕搖1-2次,使胰蛋白酶流過所有細胞表面,然後倒掉.
蓋好瓶塞,將培養瓶放在倒置顯微鏡下觀察,發現成纖維細胞變園,部分脫落,立即加入2ml有血清的培養基終止消化.
用彎頭吸管輕輕吹打成纖維細胞生長區域（可事先在鏡下用記號筆在培養瓶上劃出記號）.吹打時不要用力,也不要吹打上皮細胞生長區域.吹打結束後,再用少量培養基漂洗一遍,然後加入適量培養基於瓶內繼續培養,也可重複上述操作再進行一次.
隔幾日後或下次傳代時,再進行上述操作,進過幾次處理,就可將成纖維細胞去除或者將兩者分開。
由步驟可知是傳代前。希望對你有幫助，請採納！
2樓：黃靜晶
細胞系（cell line）指原代細胞培養物經首次傳代成功後所繁殖的細胞群體。 也指可長期連續傳代的培養細胞。所以細胞純化是首次傳代成功後所繁殖的細胞群體純化或連續傳代的培養細胞純化。
原代細胞和傳代細胞培養有哪些區別
3樓：委昆
原代細胞(primary cell) 是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞並在體外進行模擬機體培養的細胞，稱為原代細胞。一般認為，培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。
細胞株(cell strain) 是通過選擇法或克隆形成法從原代培養細胞中獲得具有特殊性質或標誌物的細胞稱為細胞株。一般認為，細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標誌必須在整個培養期間始終存在。
細胞系(cell line) 是原代細胞經首次傳代成功後即為細胞系。泛指一般可能傳代的細胞。其中能夠連續傳代的細胞叫做連續細胞系或無限細胞系，不能連續培養的稱為有限細胞系。
大多數二倍體細胞為有限細胞系。由原先存在於原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代，或傳代次數有限， 可稱為有限細胞系(finite cell line)， 如可以連續培養， 則稱為連續細胞系(continuous cell line)， 培養50代以上並無限培養下去。
人類腫瘤細胞，在體外培養半年以上，生長穩定，並連續傳代的即可稱為連續性株或系。
原代細胞和傳代細胞培養有什麼區別
4樓：能夕歷乙
在細胞培養過程中從開始在一個瓶中培養的細胞稱為原代細胞，當細胞增殖到一定程度產生接觸抑制時，就需要分裝到不同瓶是培養，分裝後的培養細胞稱為傳代細胞。
5樓：展綠柳練未
原代培養一般培養到十代左右
傳代培養可以培養至50代，甚至個別細胞發生突變形成類似於癌細胞無線增值
原代培養具有兩個特點
接觸抑制
和貼壁生長
誰有細胞傳代培養具體的操作步驟和注意事項
6樓：鈺瀟
懸浮細胞可採用加入等量新鮮培養基後直接吹打分散進行傳代，或用離心法後，加入新培養基後再吹打分散進行傳代
貼壁細胞實驗需準備超淨臺噴灑酒精，紫外照射30min。準備好培養瓶/皿，離心管，10%dmem，0.25%胰酶，d-hanks液等，帶上手套，口罩等，倒去舊培養基，用d-hanks液清洗一遍，去除沉積的死細胞等。
加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置顯微鏡下觀察，待細胞單層收縮突起出現空隙時，倒去酶液。加入1～2滴管含有血清的培養液，反覆吹打細胞，使其成細胞懸液。
以1：2或1：3進行分裝，補充新鮮培養基，並在培養瓶上做好標記，註明代號、日期，輕輕搖勻，37℃co2培養箱培養。細胞培養24h後，即可觀察培養液的顏色及細胞的生長情況。
7樓：採茶小生
1.觀察培養基是否正常，細胞狀態如何，細胞密度如何，決定是否傳代。觀察時擰緊蓋子。
2.加熱pbs、versene、培養基，(提前做好) 瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。
3.開啟超淨臺(先開風機，後開照明)，用75%乙醇清潔檯面，點燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如果廢液太多，可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個，置於架子上。
4.取尖吸管、吸量管各一支，放置在專用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。
5.取待傳代的細胞。開啟versene，用酒精燈外焰燒。燒吸管時距離酒精燈心遠些，不要把渣滓帶進去。把試劑拿入臺子的時候，儘量平穩，不要讓試劑碰到瓶口。
6.用吸量管吸取舊的培養基，置離心管中，吸量管加入versene，然後將versene瓶收起來。(加versene主要是為了將舊培養基洗去)。
在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時都不要對著細胞。
7.開啟胰酶，然後將versene棄掉。換新管，用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶後，儘快放平，使細胞消化時間一致。
8.將細胞放入37度孵箱。放孵箱2min, 收胰酶，開啟pbs. 之後拿出來鏡下隨時觀察。使用二次消化法，去除容器中殘餘的細胞。別忘了用舊培養基中和。
9.取細胞，鏡下觀察消化情況。消化程度合適之後(細胞變圓，但不漂起)，用尖吸管棄去胰酶，取離心管中的培養基加入細胞，吹打，至所有細胞從培養皿底部脫落下來。
用pbs洗細胞，versene對細胞有毒性，且不能被血清中和。然後吸取至離心管中，800 rpm離心5分鐘。
10.吸量管吸取適量培養基加入新的培養皿中。
11.細胞離心畢，用吸新培養基的管棄去上清，先把泡沫吸走。換吸量管吸取培養皿中培養基適量，加入離心管，小體積混勻，將細胞重懸，尖吸管吹勻。
12.擦計數板，用槍吸10ul的液體，計數。不要把槍伸到離心管內。
13.吸量管吸取細胞懸液，加入新的培養皿中。鏡下觀察，搖勻，放入37度孵育。收超淨臺。
細胞原代培養和傳代培養的區別
8樓：匿名使用者
原代細胞(primary cell) 是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞並在體外進行模擬機體培養的細胞，稱為原代細胞。一般認為，培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。
細胞株(cell strain) 是通過選擇法或克隆形成法從原代培養細胞中獲得具有特殊性質或標誌物的細胞稱為細胞株。一般認為，細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標誌必須在整個培養期間始終存在。
在動物細胞培養中原代培養是指到第10代還是包括10代去前
9樓：匿名使用者
從機體取下細胞、組織和器官後立即進行培養，把第一代至第十代以內的培養細胞統稱為原代培養。也就是說從機體剛取下來進行培養到大概十代這段時間都是原代培養，可有效保持原有細胞的基本性質。
10樓：緅龍
其實每種細胞的傳代極限都是不一樣的
這需要大量的實驗摸索 細胞種類 細胞所處的環境 都是很重要的影響因素現在應該已經有相關資料
但是如果高中應付考試的話，老師怎麼告訴你的，你就怎麼記就行了
傳代細胞的培養步驟
11樓：匿名使用者
1．人無菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒雙手。2．倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數。將培養用液置37℃下預熱。
3．超淨臺臺面應整潔，用0.1％新潔爾滅溶液擦淨。 4．開啟超淨臺的紫外燈照射檯面20 min左右，關閉超淨臺的紫外燈，開啟抽風機清潔空氣，除去臭氧。
5．點燃酒精燈；取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮頭；過酒精燈火焰略燒後插在無菌試管內。 6．將培養用液瓶口用75％酒精消毒，過酒精燈火焰後斜置於酒精燈旁的架子上。7．倒掉培養細胞的舊培養基。
酌情可用2—3 ml hanks液洗去殘留的舊培養基，或用少量胰酶涮洗一下。8．每個大培養瓶加入1 ml胰酶，小瓶用量酌減，蓋好瓶蓋後在倒置顯微鏡下觀察，當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養瓶，使細胞脫離胰酶，然後將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。
9．加入少量的含血清的新鮮培養基，反覆吹打消化好的細胞使其脫壁並分散，再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養基(7～10 ml／大瓶，3～5 ml／小瓶)製成細胞懸液，然後分裝到新培養瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊後再稍迴轉，以利於co2氣體的進入，將培養瓶放回co2培養箱。 10．對懸浮培養細胞，步驟7-9不做。
可將細胞懸液進行離心去除舊培養基上清，加入新鮮培養基，然後分裝到各瓶中。
12樓：
拿到的細胞，如果是凍存的，首先要復甦，步驟是，取出立刻用37攝氏度水浴溶解，然後離心去凍存液，加入十倍體積的培養液，懸浮，離心去培養液，再加入培養液，轉入培養瓶培養即可。關鍵是快速解凍。
傳代是細胞在培養瓶中長滿後，去培養液，胰酶消化使細胞脫壁，轉入離心管離心，去消化液，用培養液懸浮，取部分細胞懸液（按需要）接入新的培養瓶，加入足夠的培養液培養即可。
動物細胞培養中的細胞株和細胞系以及原代培養和傳代培養該如何簡單的理解？死抄概念者不理！用自己的話解
動物細胞培養,大致的步驟是這樣 1.從動物胚胎或者一些剛出生的動物的器官或者組織上取得細胞,配製成細胞懸浮液.把細胞液放到培養瓶中,在培養箱裡培養 原代培養.2.但是,不要以為這樣就能一直無限培養下去.因為細胞在那個瓶壁上生長的時候,如果大量增殖,細胞之間會彼此相碰,細胞細胞就會停止 增殖，出現一種...
細胞培養技術科學嗎，有依據嗎，細胞培養技術是什麼？
細胞工程技術bai已經是一門du學科了，肯定科學zhi啊 細胞技術主要dao 利用細胞生物學專的原理和方屬法，結合工程學的技術手段，按照人們預先的設計，有計劃地改變或創造細胞遺傳性的技術。包括體外大量培養和繁殖細胞，或獲得細胞產品 或利用細胞體本身。主要內容包括 細胞融合 細胞生物反應器 染色體轉移...
植物組織培養技術的細胞學理論基礎是A細胞分化B細
一個生活的植物細胞，只要有完整的膜系統和細胞核，它就會有一整套發育成一個完整版植株的遺傳基權 礎，在一個適當的條件下可以通過 分化再生成一個完整植株，這就是所謂的植物細胞全能性 這是植物組織培養的理論基礎 故c符合題意 故選 c 植物組織培養技術的理論基礎之一是 是植物細胞的全能性。是指在無菌條件，...