過離子交換柱時，pH梯度洗脫緩衝液一般用什麼緩衝液

1樓：花德文香

呵呵，剛才加了akta的培訓，就獻醜了。

離子交換色譜中，ph的影響極大。要知道為何能夠利用ph梯度改善分離選擇性？就得知道其原理：

離子色譜是利用相反電荷之間的相互作用來分離的，當檢測物質帶負電荷時，要選擇陰離子色譜柱，陰離子色譜柱帶正電荷的配基，進行陰離子-陽離子交換，結合帶負電荷的分子，經過交換後檢測物質的帶負電荷的分子就會吸附色譜柱上，然後在用高鹽洗脫，洗脫的組分先後進入檢測器，就達到了檢測的目的。

當檢測物質帶正電荷時，道理類似，自己想吧。

ph梯度可以改變檢測物質電荷、偏離等電點的程度，從而影響帶正/負電荷的分子（或離子）與色譜柱的結合能力（可以認為是牢固程度），洗脫時的難易程度就改變，從而改變了分離選擇性。

2樓：箕夕公尺庚

如果不限定純化方法，可以考慮親和層析或離子交換，但根據你問題的意思，是選定離子交換。

此時就要考慮你蛋白的等電點了，如果等電點在你穩定ph之上，就用陽離子交換柱：

設計陽離子交換層析：將你的樣品置換到你所指的穩定ph的running

buffer。同時裝柱，平衡，然後上樣，平衡，洗脫（因為你的ph不穩定，建議鹽洗脫），收峰。得你的蛋白；

如果你的等電點在穩定ph之下，就用陰離子交換柱，其步驟如上，只是改變柱子型別。

如何確定離子交換緩衝液的濃度和ph值如何保證緩衝液的ph

3樓：乙隻三農貓

計算。

緩衝液的ph值與該酸的電離平衡常數k及鹽和酸磨段的濃度有關。酸和鹽濃度等比例也增減時，溶液的ph值不變。酸和鹽濃度相等時，緩衝液的緩衝效率為最高，比例相差越大，緩衝效率越低，一般地說緩衝液有效緩衝範圍為pk±1ph。

只要知道緩衝對的pk值，和要配製的緩衝液的ph值（及要求的緩衝液爛陪總濃度）時，可按公式計算出[鹽]和[酸]的量。這樣算瞎歷譽涉及到對數的換算，較麻煩，前人為減少後人的計算麻煩，經計算已為我們總結出ph值與緩衝液對離子用量的關係列出了**。

緩衝溶液的ph值由該酸的電離平衡常數k、酸和鹽的濃度、酸和鹽的比例。