1樓:東邊更美
做蛋bai白在真核細胞的表達du,但是表達量很低,怎麼zhi解決實際上dao真核生物的蛋白專
也可以用真核細屬胞蛋白表達系統來實現,而且效果往往更好。
用原核生物來表達主要還是因為操作簡單,快速。如果希望表達和純化的蛋白性質穩定,經原核系統表達之後仍然有正確的摺疊構象,那麼使用原核表達系統就很合適了。
有的時候在不同的表達體系裡面對蛋白的表達量是有影響的。
當構建完成後攜帶有訊號肽的時候,一些蛋白在真核表達體系中表達量極低。去除訊號肽序列值後,直接表達成熟肽,表達水平明顯提高。
所以說構建的真核表達載體高表達mrna卻檢測不到目的蛋白是完全有可能的。
原核表達,為什麼空載表達的很好,目的蛋白沒有表達,可能的原因有什麼?
2樓:匿名使用者
目的蛋白的表達跟基因本身關係密切,載體,表達條件關係也很大。空載體能表達不代表你的蛋白能在該條件下表達。
3樓:
目的蛋白的訊號肽是否被宿主識別?
我用flag單抗做western blot, 檢測不到含flag標籤的目的蛋白,你覺得是為什麼呢?
4樓:匿名使用者
這個flag標籤抗體能檢測到其他帶flag標籤的蛋白嗎?
例如空載對照。如果空載也不行,那基本抗體就歇了。
如果有,就要看flag標籤是不是正確表達了,如果表達不正確也會影響到檢測的。
我最近構建真核表達質粒,測序後序列是正確但的,但就是不表達。表達蛋白抗體和標籤抗體都檢測不到。
5樓:匿名使用者
你再多挑些斑試試,真核質粒不表達,很多時候是因為轉染效率太低。我們這有挑了將近100個才找到表達的
6樓:匿名使用者
其實密碼子atg前面的鹼基是什麼?
7樓:匿名使用者
先做個real time看有沒有轉錄唄
請教:為什麼我的融合蛋白沒有誘導表達?
8樓:匿名使用者
最後9空質粒為什麼多一條帶?另外,你的蛋白如果有的話,大概是多大?和哪條marker相對?
帶有yfp的載體測序成功了,為什麼沒有表達
9樓:
可能的原bai因有很多:du
測序成功只是表示核苷zhi酸沒有問題,有沒有可能在構建dao載體時就發生了位回移而導致突變答?
有沒有由於標籤在n-端或c-端表達,而這一區段的結構恰好是包裹在目標蛋白內部的?
所用表達體系是否合適?有沒有可能表達出的蛋白被降解或形成了包涵體而沒有檢測到?
以上是最常見的幾種可能,不妨檢測一下再**。
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