1樓：匿名使用者
上游引物和下游引物。
分別和dna的兩條鏈的3'端結合。
想要擴增目的片段就是上游引物和下游引物之間的序列。
2樓：浦恐
上游引物和下游引物。 分別和dna的兩條鏈的3'端結合。
擴增的片段就是上游引物和下游引物之間的序列。
你還是好好看看pcr的簡介吧。
3樓：匿名使用者
是上下游引物，分別和片段的5』端和3』端結合，這樣才能保證目的片段的指數擴增
4樓：匿名使用者
好像是保證大量複製的是我們想得到的片段
5樓：
引物 (primer)
引物，是一小段單鏈dna或rna，作為dna複製的起始點，存在於自然中生物的dna複製（rna引物）和聚合酶鏈式反應(pcr)中人工合成的引物（通常為dna引物）。引物（dna，rna的） primer 指在核酸合成反應時，作為每個多核苷酸鏈進行延伸的出發點而起作用的多核苷酸鏈，在引物的3′-oh上，核苷酸以二酯鍊形式進行合成，因此引物的3′-oh，必須是遊離的。
引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列，一個引物與感興趣區域一端的一條dna模板鏈互補，另一個引物與感興趣區域另一端的另一條dna模板鏈互補。
在pcr（聚合酶鏈式反應）技術中，已知一段目的基因的核苷酸序列，根據這一序列合成引物，利用pcr擴增技術，
引物的結合目的基因dna受熱變性後解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然後在dna聚合酶作用下進行延伸，如此重複迴圈，延伸後得到的產物同樣可以和引物結合。
「引物」設計的原則是什麼？
6樓：匿名使用者
引物設計有 3 條基本原則：
引物與模板的序列要緊密互補。
引物與引物之間避免形成穩定的二聚體或髮夾結構。
再次引物不能在模板的非目的位點引發dna聚合反應(即錯配)。
引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列，一個引物與目的基因一端的一條dna模板鏈互補，另一個引物與目的基因另一端的另一條dna模板鏈互補。
在pcr（聚合酶鏈式反應）技術中，已知一段目的基因的核苷酸序列，根據這一序列合成引物，利用pcr擴增技術，目的基因dna受熱變性後解鏈為單鏈，引物與單鏈相應互補序列結合，然後在dna聚合酶作用下進行延伸，如此重複迴圈，延伸後得到的產物同樣可以和引物結合。
pcr引物設計的目的是找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板dna序列。如前述，引物的優劣直接關係到pcr的特異性與成功與否。對引物的設計不可能有一種包羅永珍的規則確保pcr的成功，但遵循某些原則，則有助於引物的設計。
引物設計有 3 條基本原則：首先引物與模板的序列要緊密互補，其次引物與引物之間避免形成穩定的二聚體或髮夾結構，再次引物不能在模板的非目的位點引發dna聚合反應(即錯配)。具體實現這 3 條基本原則需要考慮到諸多因素，如引物長度（primer length），產物長度（product length），序列 tm 值 (melting temperature)，引物與模板形成雙鏈的內部穩定性(internal stability, 用 ∆g 值反映)，形成引物二聚體(primer dimer)及髮夾結構（duplexformation and hairpin）的能值，在錯配位點（false priming site）的引發效率，引物及產物的gc 含量（composition），等等。
必要時還需對引物進行修飾，如增加限制性內切酶位點，引進突變等。
做real time時,用於sybr green i法時的一對引物與一般pcr的引物,在引物設計上所要求的引數是不同的。引物設計的要求：
避免重複鹼基，尤其是g。
tm=58-60度。
gc=30-80%。
3'端最後5個鹼基內不能有多於2個的g或c。
正向引物與探針離得越近越好，但不能重疊。
pcr擴增產物長度： 引物的產物大小不要太大，一般在80-250bp之間都可；80～150 bp最為合適（可以延長至300 bp）。
引物的退火溫度要高，一般要在60度以上。
要特別注意避免引物二聚體和非特異性擴增的存在。
而且引物設計時應該考慮到引物要有不受基因組dna汙染影響的能力，即引物應該跨外顯子，最好是引物能跨外顯子的接頭區，這樣可以更有效的不受基因組dna汙染的影響。
做染料法最關鍵的就是尋找到合適的引物和做汙染的預防工作。對於引物，你要有從一大堆引物中挑出一兩個能用的引物的思想準備---尋找合適的引物非常不容易。
關於blast的作用應該是通過比對，發現你所設計的這個引物，在已經發現並在genebank中公開的全部物種基因序列當中，除了和你的目標基因之外，還有沒有和其他物種或其他序列當中存在相同的序列，如和你的目標序列之外的序列相同的序列，則可能擴出其他序列的產物，那麼這個引物的特異性就很差，從而不能用。
同一模版dna在進行pcr擴增時是不是需要不同的兩種引物？為什麼資料上說引物只要tm值相似就行？
7樓：匿名使用者
pcr引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板dna序列。因此，引物的優劣直接關係到pcr的特異性與成功與否。 因為在同一pcr反應中，是用一個退火溫度的，為了保證目的片段兩端的引物都能與模板配對互搭，所以在設計引物時，儘量使兩個引物的tm值不要差別太大！
另外，附上引物的設計的基本原則：
一般引物長度為15~30鹼基，擴增片段長度為100~600鹼基對。 一般引物序列中g+c含量一般為40%~60%。而且四種鹼基的分佈最好隨機。
同時引物之間也不能有互補性，一般一對引物間不應多於4個連續鹼基的互補。
引物確定以後，可以對引物進行必要的修飾，例如可以在引物的5′端加酶切位點序列；標記生物素、熒光素、地高辛等，這對擴增的特異性影響不大。但3′端絕對不能進行任何修飾，因為引物的延伸是從3′端開始的。這裡還需提醒的是3′端不要終止於密碼子的第3位，因為密碼子第3位易發生簡併，會影響擴增的特異性與效率。
綜上所述我們可以歸納十條pcr引物的設計原則：
① 引物應用核酸系列保守區內設計並具有特異性。
② 產物不能形成二級結構。
③ 引物長度一般在15~30鹼基之間。
④ g+c含量在40%~60%之間。
⑤ 鹼基要隨機分佈。
⑥ 引物自身不能有連續4個鹼基的互補。
⑦ 引物之間不能有連續4個鹼基的互補。
⑧ 引物5′端可以修飾。
⑨ 引物3′端不可修飾。
⑩ 引物3′端要避開密碼子的第3位。
8樓：匿名使用者
那是一對引物， 通常所說的正向，反向。 他們的鹼基不一樣，當然tm值也就不一樣了。所以設計引物時儘量設計一術的tm值，有利於選擇最佳的退火溫度。
9樓：
正向引物和反向引物。。。
為什麼設計pcr引物時，後面那條引物設計出來後要反轉？
10樓：匿名使用者
兩條引物針對兩條鏈設計，因為擴增的方向都是5『-3』。每條引物針對一條鏈，這樣整個pcr反應就兩條鏈都合成出來了。所以設計的時候，第二條引物是用互補鏈為模板設計的，所以要反轉。
用引物設計軟體設計，很容易就搞清楚原理了，也不容易出錯。
為什麼做分子克隆的時候要設計2輪pcr引物
11樓：託普仕留學機構
pcr在進行鹼基配對的時候,有一定的錯配率,於是pcr的dna鏈越長,出錯的鹼基數目就越多.既然你想要進行基因測序,肯定是克隆出的結果越準確越好啊
使用分子克隆技術的好處是,它是通過生物體自身的dna複製機制來進行的.我們一般都用細菌來進行克隆,細菌本身有糾錯機制,當鹼基配對出錯時候,細菌中的一些酶會對其進行校對,使得錯配率降低100倍.
同源重組中引物的設計為什麼需要設計兩端引物
12樓：業雲夢
看你準備用什麼系統來做敲除了。原則上，不同系統對於同源臂長度要求不同，根據這個來設計引物。做敲除一般啟動子等元件無需考慮
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