為什麼普通C18色譜柱不能用純水沖洗

2025-01-14 06:45:21 字數 1955 閱讀 1408

1樓:網友

原因就是疏水性!前面說了疏水性就是抱團的個性。c18長鏈在純水條件下會抱團,然後抱團之後就很難分開,然後柱子的柱效就下降了,因為c18裡面被抱團在內部的那一部分就失去作用了,然後柱效就下降了。

這個不是很容易恢復。

為什麼加了有機相就可以了?因為有機相的甲醇或乙腈什麼的,在c18抱團的時候會起到阻礙作用。所以加一定量的有機相在裡面很重要。

抱團作用(疏水性)和柱子本身有關:有的柱子很怕水的,曾經有一根舊的填料的柱子,工程師建議我水相最多不超過80%,說老填料不行。菲羅門的柱子一般建議95%的水,有那麼一點點的有機相,就可以有效阻止抱團行為(這是少有的在說明書裡面寫出來沖洗用有機相比例的柱子)。

這說明他們的填料裡面有阻擋的基團了,5%足夠的有機相就夠。另外,碳載量高的柱子肯定怕水,因為c18多,容易抱團;碳載量低的相對不是很怕水。

2樓:胡爾小新

容易引起疏水坍塌,把強保留物質衝出來,會毀了柱子的,所以水相不能超過95%,最開始的梯度淋洗也是高有機相到高水相,但是不是純水相。

c18色譜柱使用的日常注意事項有哪些

3樓:鵝子野心

在使用液相色譜c18儀柱過程中,須注意以下事項:

1、新c18色譜柱在使用前,須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗,作用是使固定相能充分潤溼、碳鏈舒展,使色譜柱的效能達到好狀態。具體操作是,將配製好65%的乙腈/水沖洗後,把色譜柱進口端連線在色譜儀上,出口端放空(不可連上檢測器,以免汙染了檢測器),以的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹乾,過20分鐘後再接上檢測器,以的流速,繼續沖洗2~8小時;

2、液相色譜儀檢測分析樣品完畢後,須沖洗色譜柱。尤其是流動相中含有酸或鹽時,需將色譜柱中的酸或鹽沖洗乾淨,通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積;

3、若色譜柱處於長期閒置狀態時,要將色譜柱沖洗,建議沖洗3-4小時以上,後儲存在純有機試劑或高比例的有機試劑溶液(如90%甲醇水)中;?

4、由於c18柱的固定相疏水性較強,在使用過程中儘量不要使用高水相條件,若水相比例過高易引起固定相疏水塌陷,引起柱效迅速下降,甚至造成不可逆的負面影響;由於碳載量高,表現尤為明顯,建議使用過程中水相比例不超過90%;

5、色譜柱壓力公升高、柱效能下降:通常為色譜柱被汙染,對色譜柱進行再生處理可恢復部分柱效;

6、色譜柱壓力驟公升:通常由鹽析出或篩板堵塞引起,若是鹽析出,用10%甲醇水低流速衝?洗至壓力恢復即可;若判斷並非鹽析出,以純甲醇或10%甲醇水為流動相反衝色譜柱(將色譜柱反接,不接檢測器),若反衝半小時仍無效果則說明反衝無效,需尋找其他原因。

c18這種型號的色譜柱要怎麼保護才妥當?

4樓:五心五度

c18色譜柱的正確使用和維護十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護c18色譜柱。

避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使c18色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然公升高或降低也會衝動柱內填料,因此在調節流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩(如前所述)。

應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。

一般說來c18色譜柱不能反衝,只有生產者指明該柱可以反衝時,才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。

選擇使用適宜的流動相(尤其是ph),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連線一預柱,分析柱是鍵合矽膠時,預柱為矽膠,可使流動相在進入分析柱之前預先被矽膠「飽和」,避免分析柱中的矽膠基質被溶解。

避免將基質複雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內,需要對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連線一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應該經常更換。

經常用強溶劑沖洗c18色譜柱,清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時,對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右,即常規分析需要50~75ml。

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