1樓:阿魯巴星人
說明引物有非特異性擴增。所以,當你的樣品中出現一模一樣的條帶的時候,要小心了,說明這條帶可能是非特異性擴增引起的。
為什麼pcr陰性總有條帶出現
2樓:羽動一生
提高退火溫度,或重新設計引物,或者是陰性對照被汙染,當然還有其它好多小原因,要是還沒解決,請細說並追問。
為什麼我的pcr陰性對照總是跑出陽性條帶
3樓:龍鳳油洺月
實驗室體系或者環境有汙染,把所有的物料都換了,同時換一個房間重做,試試吧
菌落pcr電泳條帶很淡,但是陽性對照卻很亮,陰性對照也有淡淡的條帶,為啥,
4樓:阿魯巴星人
初步判斷有汙染。
最好上圖來看看,不然很難判斷
我做pcr陰性對照的水也能p出目的條帶,請問都會是什麼原因,解釋下,謝謝
5樓:匿名使用者
所有的材料都換過了嗎? dntp 酶 mgso4 h2o ?
水是滅菌的嗎?
6樓:天使的快樂豬
把加樣槍都用紫外殺菌消消毒吧 然後再試試
7樓:匿名使用者
有兩種可能性:
1:水不是純淨水,其中含有真菌的基因組
2:你體系中的某一個組分有汙染!
你可以不加水作為模板也就是說不加入模板也能擴增出來的話那就是體系中某個組分汙染了!
陰性對照怎麼總是有目的條帶
8樓:
假陽性是來指不含目的片段源的模板
,經過pcr,批出了與bai目的模du板bp數類似的片段zhi,給人一種含有目的片段的dao假象.說明是汙染造成擴增的。 假陰性是說,你的樣品中有目的片段,但由於實驗條件不合適,沒有p出目的條帶,這種情況讓人誤以為是陰性,所以叫假陰性.
說明反應體系中存在抑制物。
菌落pcr跑出2條帶怎麼回事
9樓:
又陰性對照,陽性對照,有目標帶的話,
幾條帶不重要,
因為只是檢查有沒有而已,不用取優化pcr,浪費時間。
菌落pcr檢測有條帶,但是測序結果根本沒有連上,是什麼原因
10樓:匿名使用者
菌落baipcr的假陽性很多,也有du很多原因,所以一zhi般都是需要測序結果佐證的。
dao1,引物設計不合適專:選擇的擴增屬序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行 pcr 擴增時,擴增出的 pcr 產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現假陽性。
需重新設計引物。
2,靶序列或擴增產物的交叉汙染:這種汙染有兩種原因:一是整個基因組或大片段的交叉汙染,導致假陽性。
這種假陽性可用以下方法解決:操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。
所用離心管及樣進槍頭等均應一次性使用。必要時,在加標本前,反應管和試劑用紫外線照射,以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸汙染,這些小片段比靶序列短,但有一定的同源性。
可互相拼接,與引物互補後,可擴增出 pcr 產物,而導致假陽性的產生,可用巢式 pcr 方法來減輕或消除。
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