1樓:匿名使用者
454測序:dna文庫製備→empcr→上機測序
solexa測序:文庫製備→cluster擴增→邊合成邊測序
solid測序:樣品製備→emulsion pcr和底物準備→測序反應→影象收集→資料分析
2樓:美美
這一句兩句能說清楚嗎,逗人玩呢吧
什麼是solexa 測序技術
3樓:匿名使用者
solexa 高通量測序法原理
solexa 方法是利用單分子陣列測試 genotyping ,此種測序法首先是將 dna 從細胞中提取,然後將其打斷到約 100 - 200bp 大小,再將接頭連線到片段上,經 pcr 擴增後製成 library 。隨後在含有接頭的晶片( flow cell )上將已加入接頭的 dna 片段繫結在 flow cell 上,經反應,將不同片段擴增。在下一步反應中,四種熒游標記的染料應用邊合成邊測序( sequencing by synthesis )的原理,在每個迴圈過程裡,熒游標記的核苷和聚合酶被加入到單分子陣列中。
互補的核苷和核苷酸片斷的第一個鹼基配對,通過酶加入到引物上。多餘的核苷被移走。這樣每個單鏈 dna 分子通過互補鹼基的配對被延伸,利用生物發光蛋白,比如螢火蟲的熒光素酶,可通過鹼基加到引物後端時所釋放出的焦磷酸鹽來提供檢測訊號。
針對每種鹼基的特定波長的鐳射激發結合上的核苷的標記,這個標記會釋放出熒光。熒光訊號被 ccd 採集,ccd 快速掃描整個陣列檢測特定的結合到每個片斷上的鹼基。通過上述的結合,檢測可以重複幾十個迴圈,這樣就有可能決定核苷酸片斷中的幾十個鹼基。
solexa 的這種方法,可在一個反應中同時加入 4 種核苷的標籤,採用邊合成邊測序( sbs - sequencing by synthesis ),可減少因二級結構造成的一段區域的缺失。並具有所需樣品量少,高通量,高精確性,擁有簡單易操作的自動化平臺和功能強大等特點,此反應可以同時檢測上億個核苷酸片斷 , 因此在同一個晶片或幾個晶片上花費很少(只需常規方法的 1 %)的成本就可測試全基因組。
隨著 dna 測序表達譜產品( dna sequencing ,expression profiling )以及 microrna 分析平臺 -solexa genome analysis system. 相繼問世,使得此種方法在更多的領域得到應用。
illumina公司的solexa測序技術為廣大使用者提供了強大的下一代測序方法,為目前遺傳分析和功能基因組等熱門研究領域的部分熱門課題提出了全新的應用方案。
測序與重測序
無論您需要測定的是整個基因組的序列還是基因組上一個大片斷候選區域的序列, illumina genome analyzer系統都是當今世界上最先進、最經濟的平臺。solexa測序技術和可逆中止化合物染料(reversible terminator chemistry)奠定了在下一代測序技術中高質量、高通量、低成本資料產出的基礎。
表達譜分析
通過對樣本中數以百萬計的cdna標籤同時進行序列測定,genome analyzer系統可以使您對整個轉錄組進行數字化的分析,而成本僅僅維持在與目前其他模擬化分析技術同樣的水平。由於我們的技術無需利用任何轉錄子特異性雜交探針,您可以同時進行全基因組轉錄子的發掘與定量分析,而無需事先知道基因組的註釋情況。
小rna鑑定與定量分析
solexa測序技術可以提供一套全新獨特的,適用於各個物種的小rna深度鑑定與定量分析研究平臺。通過大量的平行測序,研究人員可以發掘、鑑定並定量出任何物種全基因組水平的小rna圖譜。應用這種低成本快速測定數百萬標籤序列的新方法,illumina genome analyzer提供瞭解密小rna圖譜獨一無二的方法。
**來寶網
4樓:不曾夨來過
在solexa測序中一段待測序列會接上2種接頭,在flowcell中也有和2種接頭互補的兩種oligo序列,首先是你的單鏈序列會和其中一個oligo互補結合,然後合成第二條鏈,隨後將你的第一條鏈剪掉,鹼性溶劑洗去.第二條鏈就會和第二種接頭互補結合,就會形成一種橋型.
成橋有什麼優勢?成橋後可以控制的去除其中的一條,這樣測序就可以完成兩頭的測序.當然測序長度也就多了一倍.
454測序:dna文庫製備→empcr→上機測序solexa測序:文庫製備→cluster擴增→邊合成邊測序solid測序:
樣品製備→emulsion pcr和底物準備→測序反應→影象收集→資料分析
什麼是普通的基因測序,它和高通量測序有什麼區別嗎
5樓:邂逅
「普通的基因測序」應該
是指「常規dna測序」吧,是用sanger法(也就是雙脫氧法)進行測序的方法,目前非常普遍的是直接用abi 3730xl 進行的自動測序,基本上可以做到600bp-800bp的讀長。
高通量測序的概念其實是一個相對的概念,在2023年的時候,3700、megabace等儀器上的測序也是高通量測序,是相對手工測序或者跑平板膠來說的。
不過到2023年以後,高通量測序就改指第二代測序(next generation sequencing),454、solexa(後改為illumina)和solid等第二代測序,比3730等第一代測序的通量提高了成千上萬倍,甚至上億倍,所以稱為高通量測序。
ngs的特點主要有:
1、通量高。一個run能產生500mb-600gb的資料量。
2、讀長相對較短。454(約400-500bp),llumina(100-250bp),solid(75-100)。
3、單位資料的成本非常低。現在很多專案測序的費用。已經非常低。生物資訊分析成本變得更為重要了。
第二代高通量測序都有哪些平臺
6樓:上海基研生物
illumina公司的solexa測序平臺,目前主流的型號的hiseq-2500,以及hiseq-2000,資料通量在每張flow cell 300g資料,每次最多可以上2張flow cell,單張flow cell執行時間大約在11天左右。讀長通常是100bp,據說近期有了長度上的突破。還有一個型號是miseq,該機器執行通量較小,但是讀長大約在150bp以上,常用於微生物檢測,而且該型號獲得fda認證,可以進行臨床樣本的檢測。
solexa的錯誤型別主要是顛換。
羅氏454平臺,主要特點是測序長度很長,目前大於1k的測序沒有什麼難度了,比較適合基因組測序,用於搭建基因組框架,也常用於微生物基因組測序。該平臺主要的錯誤型別是插入缺失。
abi的solid平臺,聽說該平臺不在維護了,故而不再描述。
life的ion torrent平臺,目前主要有2種型號,較早的一個型號是pgm,該測序儀原理類似於454測序,與454不同的是,454是化學反應發光進行檢測,而pgm是半導體測序,檢測h離子,如果發生了鹼基互補配對,那麼高能磷酸鍵就會釋放h離子,導致電位變化,從而根據已知加入的鹼基,就可以判斷待測序列是否與已知加入的鹼基發生互補,從而達到測序目的,測序長度可以達到400bp,主要用於微生物的檢測,錯誤型別也是插入缺失錯誤。最新的型號是ionproton,該機器與pgm測序原理一致,但是測序通量由pgm的1g資料上升至10g資料,測序精度也較pgm有大幅度提升,測序時間大約是1天。
pacbio的單分子三代測序,該測序儀最大的特點就是測序長度比454更長,更加有利於基因組的拼接工作,有些較小的微生物可以直接將基因組測通成環狀。
7樓:潛龍9勿用
illumina 的hiseq平臺和miseq平臺;羅氏的454平臺;life的ion torrent平臺。具體的通量、讀長等引數都可以在網上查到。
8樓:烏亞罕
華大基因公司測序平臺
基因組高通量測序的原理
9樓:暴走少女
測序方案建立在雙脫氧測序法(sanger等,1977)的基礎上。為了從每一克隆插入片段兩端成對地進行測序,每一個質粒模板dna板應配備兩個384孔迴圈測序反應板。
機械臂負責等分模板試樣,起與反應液混合的作用,反應液含有雙脫氧核苷酸、熒游標記的核苷酸、taqdna聚合酶、序列引物和緩衝液。
模板和反應板有條形碼,且在biomekfx移液操作工作站上有條形碼讀取器跟蹤,確保模板和反應液轉移中沒有錯誤。30~40線性擴增步驟連續迴圈在mjresearchtetrads或9700熱迴圈儀(ap—pliedbiosystems)中進行。
基因組測序的原理與方法及關進裝置?
10樓:楊風遊
全基因組測序是對未知基因組序列的物種進行個體的基因組測序。2023年, renato dulbecco是最早提出人類基因組定序的科學家之一。他認為如果能夠知道所有人類基因的序列,對於癌症的研究將會很有幫助。
美國能源部(doe)與美國國家衛生研究院(nih),分別在2023年與2023年加入人類基因組計劃。除了美國之外,日本在2023年就已經開始研究相關問題,但是並沒有美國那樣積極。到了2023年,詹姆士·華生(dna雙螺旋結構發現者之一)成為nih的基因組部門主管。
2023年開始國際合作。2023年,多個國家召開百慕達會議,以2023年完成定序為目標,分配了各國負責的工作,並且宣佈研究結果將會及時公佈,並完全免費。
2023年,克萊格·凡特的塞雷拉基因組公司成立,而且宣佈將在2023年完成定序工作。隨後國際團隊也將完成工作的期限提前。2023年6月26日,塞雷拉公司的代表凡特,以及國際合作團隊的代表弗朗西斯·柯林斯(francis collins),在美國**柯林頓的陪同下發表演說,宣佈人類基因組的概要已經完成。
2023年2月,國際團隊與塞雷拉公司,分別將研究成果發表於《自然》與《科學》兩份期刊。在基因組計劃的研究過程中,塞雷拉基因組使用的是霰彈槍定序法(shotgun sequencing),這種方法較為迅速 ,但是仍需以傳統定序來分析細節。全基因組測序技術主要包括第二代測序技術(ngs)和第三代測序技術。
第二代測序技術已經能夠快速、低成本的進行全基因組測序,其裝置**商主要是solexa (現被illumina公司合併),454(羅氏公司)和solid(ab公司)。第三代測序技術於2023年4月正式推廣,其單分子實時(**rt)測序技術完全不同與第二代測序,它的序列讀長高達3000 bp(pacific biosciences 公司研發)。
第二代高通量測序都有哪些平臺第二代DNA測序技術的操作流程
illumina公司的solexa測序平臺，目前主流的型號的hiseq 2500，以及hiseq 2000，資料通量在每張flow cell 300g資料，每次最多可以上2張flow cell，單張flow cell執行時間大約在11天左右。讀長通常是100bp，據說近期有了長度上的突破。還有一個型...
我的第二代身份證掉了，怎麼辦啊，第二代身份證丟失了怎麼辦呀
第一，二代證必須掛失，不管二代證的防偽係數多高，一樣可以被壞人利用 第二，必須要補辦的，因為一代證倒底能用到什麼時候還不知道，一旦突然停用，而補辦需要3個月的時間，你將面臨無證可用的境地。身份證丟失應該及時去戶籍所在地公安機關補辦。銀行卡丟了去掛失，你已經掛失了，沒事，掛失一個星期後就可以辦理業務了...
第二代殘疾證的發放流程，辦理殘疾證的流程（希望有經驗的回答）
第二代殘疾證，辦理殘疾證的流程是怎麼樣的 辦理殘疾證的流程 希望有經驗的回答 辦理殘疾證的流程 1 殘疾人證由省級殘聯統一編號，縣級殘聯負責核發和管理。2 以 中國殘疾人實用評定標準 認定發證。對於明顯殘疾，易於認定殘疾類別 等級者，可直接認定發證 縣級殘聯難以直接認定殘疾類別 等級者，請縣及縣級以...