1樓:禾鳥
1、原理:
southern印跡雜交是進行基因組dna特定序列定位的通用方法。其基本原理是:具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下,可按鹼基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。
一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的dn**段,將膠上的dna變性並在原位將單鏈dn**段轉移至尼龍膜或其他固相支援物上,經幹烤或者紫外線照射固定,再與相對應結構的標記探針進行雜交,用放射自顯影或酶反應顯色,從而檢測特定dna分子的含量。
2、應用:
(1)遺傳病診斷;
(2)dna圖譜分析;
(3)檢測樣品中的dna及其含量:先將dna樣品(含不同大小的dn**段)先按片段長短進行分離,然後進行雜交。這樣可確定雜交靶分子的大小。
(4)pcr產物分析。
擴充套件資料
southern印跡雜交技術的過程:
southern印跡雜交技術包括兩個主要過程:
一是將待測定核酸分子通過一定的方法轉移並結合到一定的固相支援物(硝酸纖維素膜或尼龍膜)上,即印跡(blotting);
二是固定於膜上的核酸與同位素標記的探針在一定的溫度和離子強度下退火,即分子雜交過程。該技術是2023年英國愛丁堡大學的e.m.
southern首創的,southern印跡雜交故因此而得名。
早期的southern印跡是將凝膠中的dna變性後,經毛細管的虹吸作用,轉移到硝酸纖維膜上。印跡方法如電轉法、真空轉移法;濾膜發展了尼龍膜、化學活化膜(如apt、abm纖維素膜)等。
利用southern印跡法可進行克隆基因的酶切、圖譜分析、基因組中某一基因的定性及定量分析、基因突變分析及限制性片斷長度多型性分析(rflp)等。
2樓:匿名使用者
southern blot是southern這個人發明的,是「核酸雜交技術」結合「核酸印跡技術」的經典實驗。
大致原理是:不同**的核酸分子,經變性、退火處理,當它們之間有鹼基互補配對時,就可能會結合在一起。形成dna/dna,dna/rna雜交體。
那麼我們可以根據這個原理,設計針對目的dna的核酸探針(常見的有cdna探針、rna探針、寡核苷酸探針等),探針上標記了相關的標記(同位素標記、地高辛標記等等)。
大致的實驗過程是:southern blotting最開始要將全基因組dna酶切成許多小片段。然後跑凝膠電泳。
然後是核酸印跡(就是把凝膠上的dna原位不動的印跡到一張可以吸附dna的膜上,常見的有尼龍膜、硝酸纖維素膜等),印跡的方式有一些不同,最經典的是採用虹吸印跡。然後通過紫外交聯或者120℃烘烤30分鐘的方法將核酸固定。然後用核酸探針去雜交這張膜。
然後雜交完畢後就是顯色的步驟了(根據探針上面標記的不同有放射自顯影、底物顯色、化學發光等)。
中間稍微省略了一些細節,具體每一步操作你要看說明書。
那麼southern究竟可以用來幹什麼呢?稍微總結了三點:
1、限制性片段長度多型性(rflp)的檢測,可以檢測點突變。看雜交的條帶的不同。
2、目的基因的拷貝數。看雜交的丰度值。
3、測目的基因的大小。看顯色帶在膜上面的具體位置。
其他的可能還有一些,不一一列舉。
最後說明一下,southern是用來做dna實驗的,northern是用來做rna實驗的,western是用來做蛋白實驗的。
純手打,再加點分唄。
3樓:黑雨雲舟
基本原理的描述不是southern bolt而是凝膠電泳分離技術啊
4樓:eunice楊
一、southern印跡雜交(southern blot)是2023年由英國人southern建立,是研究dna圖譜的基本技術,在遺傳病診斷、dna圖譜分析及pcr產物分析等方面有重要價值。
二、基本原理
southern印跡雜交是先將dna樣品(含不同大小的dn**段)先按片段長短進行分離,然後進行雜交。這樣可確定雜交靶分子的大小。因此,製備dna樣品後需要進行電泳分離。
在恆定電壓下,將dna樣品放在0.8~1.0%瓊脂糖凝膠中進行電泳,標準的瓊脂糖凝膠電泳可分辨70-80000bp的dn**段,故可對dn**段進行分離。
但需要用不同的膠濃度來分辨這個範圍內的不同的dn**段。原則是分辨大片段的dna需要用濃度較低的膠,分辨小片段的dna則需要濃度較高的膠。經過一段時間電泳後,dna按分子量大小在凝膠中形成許多條帶,大小相同的分子處於同一條帶位置。
另外為了便於測定待測dna分子量的大小或是所處的分子大小範圍,往往同時在樣品鄰近的泳道中加入已知分子量的dna樣品即標準分子量dna (dna marker)進行電泳。dna marker可以用放射性核素進行末端標記,通過這種方式,雜交後的標準分子量dna也能顯影出條帶。
三、主要應用
1.遺傳病診斷
2.dna圖譜分析
3.檢測樣品中的dna及其含量
4.pcr產物分析
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