1樓：匿名使用者
pcr產物純化後測定dna的濃度，按照適當的比例與t-vector在含有連線酶的buffer中4°過回夜或37°3小時連線，然後連線產答
物塗篩選平板（alb)篩選即可。
要確保產物末端有a尾，如果是高保真酶擴增的產物需先加a尾，純化後再連線；再就是載體和產物的比例要合適。
t載體的作用是什麼？克隆時為什麼要用t載體？
2樓：匿名使用者
我做過幾個克隆，沒用過t載體，直接將酶切後純化的產物進行連線，照樣可以連線成功，基本上都會有10-50個克隆長出來。我用的是sal i和nde i這兩個酶切位點，似乎這兩個都是平端的哦。
3樓：響馬飛騎
t載體又叫t質粒載體，是指t4噬菌體dna連線酶，作用是在有mg2 、atp存在的連線緩衝系統中，將分別經酶切的載體分子與外源dna分子進行連線。
dna連線酶有兩種：t4噬菌體dna連線酶和大腸桿菌dna連線酶。兩種dna連線酶都有將兩個帶有相同粘性末端的dna分子連在一起的功能，而且t4噬菌體dna連線酶還有一種大腸桿菌dna連線酶沒有的特性，即能使兩個平末端的雙鏈dna分子連線起來。
t4噬菌體dna 連線酶催化dna 連線反應分為3 步：首先，t4 dna 連線酶與輔因子atp形成酶-atp複合物；然後，酶-atp複合物再結合到具有5』磷酸基和3』羥基切口的dna上，使dna腺苷化；最後產生一個新的磷酸二酯鍵，把切口封起來。連線反應通常將兩個不同大小的片斷相連。
形象的說，dna水解酶相當於剪刀，剪斷dna，而t載體（dna連線酶）就相當於針線。如果克隆時不用，就不能將dna連線起來。
t載體是什麼？
4樓：匿名使用者
一段線性雙鏈dna載體，載體的
兩端3『末端各有一個額外的t。因為大部分taq聚合酶會在內pcr產物3』末容端新增一個額外的a，所以使用t載體可以比較方便且高效（相對於平末端）進行pcr產物的連線反應，以方便克隆的構建或檢測。
5樓：箱子太沉
不是t噬菌體，你錯了，t載體是一種質粒載體
6樓：夜遊紅樓
t型別噬菌體，可以用它作為載體將目的基因匯入細菌。
7樓：實茂孟爾白
空的dna質粒，可以切割，插入dn**段，可以轉錄表達。轉基因的基本質粒之一。
基因連入t載體後再連入載體2301,步驟是什麼?
8樓：匿名使用者
你的目的基因兩端加了酶切位點麼？或者目的基因轉錄序列的外側有沒有酶切位點？有的話雙酶切再連線。沒有的話建議你設計帶酶切位點的接頭，然後再連到t載體上去。
這樣。你先把含t載體的菌搖起來，提質粒，雙酶切，割膠**酶切片段（小的那一段，就是你要的基因）。2301載體你看看有沒有那兩個酶切位點，同尾酶也可以，雙酶切，**切開的載體。
然後把載體和基因片段連線，轉化感受態細菌，挑平板，就行了。不要用菌液，要用提出的質粒！酶切體系你購買酶的時候會告訴你的。
9樓：浙大阿米巴
請說清楚，不是每個人都在從事和你一樣的工作。
什麼是t載體？t載體分為哪幾類？有什麼區別?
10樓：匿名使用者
t載體又稱bait-vector。聚合酶鏈反du應產物的克隆運載體，線性化後
zhi兩側3′端dao各多出一個脫氧胸苷酸內(t)。由於pcr產物兩容側3′端通常含單個脫氧腺苷酸(a)，與t載體之間的a-t互補性可提高pcr產物克隆的效率。
t載體是一種克隆載體，也就是用於在受體細胞中進行目的基因擴增的載體，它不能大量表達。多用於克隆pcr產物，一般用一些常見的載體改造成的，一般的dna聚合酶沒有3'-5'核酸外切酶活性，即酶的校正活性，在pcr產物3'末端以非模板依靠方式加上一個腺苷酸殘基（a），這樣pcr產物的3'腺苷酸可和t-載體的3'胸腺嘧啶 互補，t-載體系統進行有效連線的基礎正是這種鹼基配對作用。相反，有校正活性的聚合酶將移去這個3' 突出端，產生平端pcr產物，這種產物不能直接用t-載體系統進行克隆。
假如想要一pcr擴增基因的產物大量表達，常見的方法是先將pcr產物連入t載體擴增（所用t載體需事先設計好酶切位點），再用相應酶切下目的片段，然後連入以同樣酶切處理後的表達載體大量表達蛋白質。
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