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微生物製藥技術
工業微生物技術是可持續發展的一個重要支撐,是解決資源危機、生態環境危機和改造傳統產業的根本技術依託。工業微生物的發展使現代生物技術滲透到包括醫藥、農業、能源、化工、環保等幾乎所有的工業領域,並扮演著重要角色。歐美日等國已不同程度地制定了今後幾十年內用生物過程取代化學過程的戰略計劃,可以看出工業微生物技術在未來社會發展過程中重要地位。
微生物製藥技術是工業微生物技術的最主要組成部分。微生物藥物的利用是從人們熟知的抗生素開始的,抗生素一般定義為:是一種在低濃度下有選擇地抑制或影響其他生物機能的微生物產物及其衍生物。
(有人曾建議將動植物**的具有同樣生理活性的這類物質如魚素、蒜素、黃連素等也歸於抗生素的範疇,但多數學者認為傳統概念的抗生素仍應只限於微生物的次級代謝產物。)近年來,由於基礎生命科學的發展和各種新的生物技術的應用,報道的微生物產生的除了抗感染、抗腫瘤以外的其他生物活性物質日益增多,如特異性的酶抑制劑、免疫調節劑、受體拮抗劑和抗氧化劑等,其活性已超出了抑制某些微生物生命活動的範圍。但這些物質均為微生物次級代謝產物,其在生物合成機制、篩選研究程式及生產工藝等方面和抗生素都有共同的特點,但把它們通稱為抗生素顯然是不恰當的,於是不少學者就把微生物產生的這些具有生理活性(或稱藥理活性)的次級代謝產物統稱為微生物藥物。
微生物藥物的生產技術就是微生物製藥技術。可以認為包括五個方面的內容:
第一方面 菌種的獲得
根據資料直接向有科研單位、高等院校、工廠或菌種保藏部門索取或購買;從大自然中分離篩選新的微生物菌種。
分離思路 新菌種的分離是要從混雜的各類微生物中依照生產的要求、菌種的特性,採用各種篩選方法,快速、準確地把所需要的菌種挑選出來。實驗室或生產用菌種若不慎汙染了雜菌,也必須重新進行分離純化。具體分離操作從以下幾個方面。
定方案:首先要查閱資料,瞭解所需菌種的生長培養特性。
取樣:有針對性地採集樣品。
增殖:人為地通過控制養分或培條件,使所需菌種增殖培養後,在數量上佔優勢。
分離:利用分離技術得到純種。
發酵效能測定:進行生產效能測定。這些特性包括形態、培養特徵、營養要求、生理生化特性、發酵週期、產品品種和產量、耐受最高溫度、生長和發酵最適溫度、最適ph值、提取工藝等。
第二方面 高產菌株的選育
工業上生產用菌株都是經過選育過的。工業菌種的育種是運用遺傳學原理和技術對某個用於特定生物技術目的的菌株進行的多方位的改造。通過改造,可使現存的優良性狀強化,或去除不良性質或增加新的性狀。
工業菌種育種的方法:誘變、基因轉移、基因重組。
育種過程包括下列3個步驟: (1)在不影響菌種活力的前提下,有益基因型的引入。(2)希望基因型的選出。(3)改良菌種的評價(包括實驗規模和工業生產規模)。
選擇育種方法時需綜合考慮的因素(1)待改良性狀的本質及與發酵工藝的關係(例如分批或者連續發酵試驗);(2)對這一特定菌種的遺傳和生物化學方面認識的明瞭程度;(3)經濟費用。如果對特定菌種的基本性狀及其工藝知曉甚少,則多半採用隨機誘變、篩選及選育等技術;如果對其遺傳及生物化學方面的性狀已有較深的認識,則可選擇基因重組等手段進行定向育種。
工業菌種具體改良思路:(1)解除或繞過代謝途徑中的限速步驟(通過增加特定基因的拷貝數或增加相應基因的表達能力來提高限速酶的含量;在代謝途徑中引伸出新的代謝步驟,由此提供一個旁路代謝途徑。) (2)增加前體物的濃度。
(3)改變代謝途徑,減少無用副產品的生成以及提高菌種對高濃度的有潛在毒性的底物、前體或產品的耐受力。(4)抑制或消除產品分解酶。 (5)改進菌種外泌產品的能力。
(6)消除代謝產品的反饋抑制。如誘導代謝產品的結構類似物抗性。
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操作大致為:1、原料選擇與預處理
2、原料的粉碎
3、提取
4、分離純化
5、濃縮
6、結晶與重結晶
7、乾燥
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