1樓:匿名使用者
最經典的是酚氯仿法,提取的dna儲存時間長,但是比較麻煩。
其次是chelex-100法,dna儲存時間短,適合短期內用。
試劑盒法,省時省力,效果好,但是**貴,老闆有錢的話,推薦此法。
2樓:若比鄰
血液中dna的提取方法
(1) 將冰凍的血在室溫下溶化;
(2) 取1ml血液轉入一無菌的2ml離心管中,加入等體積的pbs磷酸鹽緩衝液,充分混勻後12000rpm離心5min,棄上清;
(3) 加入667µl ste,24µl的20%的sds,37℃水浴1h;
(4) 加10µl的20mg/ml的蛋白酶k混勻,55℃水浴消化過夜(10~14h);
(5) 將消化的樣品加入等體積的tris飽和酚,充分搖勻,12000rpm離心10min;
(6) 將上層水相轉入另一無菌2ml離心管中;再加入等體積的tris飽和酚,充分搖勻,12000rpm離心10min;
(7) 將上層水相轉入另一無菌2ml離心管中;並加入等體積的酚∶氯仿∶異戊醇(25∶24∶1),旋渦振盪至充分混勻,12000rpm離心10min;
(8) 將上層水相轉入另一無菌2ml離心管中;並加入等體積的氯仿∶異戊醇(24∶1),充分振盪混勻,12000rpm離心10min;
(9) 將上清液轉移到另一無菌2ml離心管中;加入2倍體積的冰乙醇,1/10體積醋酸鈉水平搖動,直到可見絮狀dna析出;
(10) 將樣品置-20℃冰箱冷凍30min或冰浴15~20min,取出後再次12000rpm離心10min,使dna沉澱;
(11) 用槍頭將dna挑到另一無菌離心管中,用適量的70%乙醇洗滌並晃動,以洗出dna的雜質;
(12) 倒出乙醇,將dna用真空乾燥或自然晾乾,加入適量的te緩衝液回溶,-20℃儲存備用。
3樓:匿名使用者
方法實際上都是差不多的
首先先裂解紅細胞
讓後收集白細胞
將白細胞裂解收集上清
將上清用乙醇-異丙醇沉澱法**
有不少試劑盒,實際上原理是這樣的最好
因為純度高,**的產量也不錯,對人體無害
4樓:
放入清水中使細胞破裂,在用差速離心法分離。
植物細胞先出去細胞壁再提取。
dna提取血樣怎麼儲存
5樓:匿名使用者
如果想長期儲存,放在-80度可以儲存5年以上,但是血樣的質量略有下降,提取成功率在90%以上。
血液提取dna的有關問題
6樓:匿名使用者
1 材料和方法
1.1 樣本** 靜脈抽取30份健康體檢者血樣。10份用edta抗凝, 10份不加抗凝處理,10份不抗凝在-40 ℃凍存2 a左右。
1.2 dna提取方法 取凝血塊,用9 g/l 氯化鈉勻漿大約30 s,每換一個樣本都要用70%乙醇和9 g/l 氯化鈉清洗勻漿器以避免交叉汙染。取勻漿後樣本1 ml置於離心管中,室溫8 000 r離心5 min後,去掉上層。
血細胞在1 ml的tris緩衝液i(10 mmol/l tris�hcl,ph 8.0;10 mmol/l 氯化鉀;10 mmol/l 氯化鎂;2 mmol/l edta,ph 8.0;25 ml/l triton x�100)中裂解10 min, 其間輕輕用力充分混勻, 室溫10 000 r離心2 min,沉澱要用tris 緩衝液i洗2次。
將沉澱用220 μl的tris 緩衝液ii (10 mmol/l tris�hcl,ph 8.0;10 mmol/l 氯化鉀;10 mmol/l 氯化鎂;2 mmol/l edta,ph 8.0;0.
4 mol/l 氯化鈉;10 g/l sds)懸浮,輕輕振盪試管, 使底部細胞團塊散開,在56 ℃保溫15 min裂解。加入100 μl 5 m 氯化鈉充分振盪沉澱去除蛋白質。10 000 r離心5 min,取上清。
加2.5倍體積的無水乙醇沉澱dna後,10 000 r離心5 min,棄上清。室溫晾20 min左右待酒精揮發乾淨後以適量te緩衝液(10 mmol/l tris�hcl,ph 8.
0,1 mmol/l edta)回溶。edta抗凝血中dna的提取從去掉上層開始。
1. 3 dna濃度檢測 用分光光度計在260 nm測dna濃度。
1. 4 dna純度檢測 dna的純度用a260/a280比值表示[3]。結果以均值±sd表示。
1. 5 dna分子量檢測 dna樣本的完整性用0.7%瓊脂糖凝膠電泳證實,溴化乙錠染色,紫外燈觀察。
1. 6 pcr檢測 pcr擴增組織型纖溶酶原啟用因子(t�pa)第8內含子alu等位基因插入(i)和缺失(d)二態性[6]來評價dna的可靠性。pcr引物序列如下:
alu1 5'�gta aga gtt ccg taa cag gac agc t�3', alu2 5'�ccc cac cct agg aga act tct ctt t�3'。反應體系組成為:10×pcr buffer 5 μl , 25 mm 氯化鎂 6 μl , 10 mm each dntps 1 μl , 10 μm primer上下游各1 μl , dna 2 μl ,taq酶1 μl 。
pcr反應程式為:95 ℃5 min預變性,然後94 ℃ 1 min ,58 ℃ 1 min,72 ℃ 2 min迴圈40次,在72 ℃充分延伸10 min。
1. 7 結果 以均值±sd表示。
2 結果
凝血和抗凝血的dna產量和純度(a260/a280)相似。這些資料和用蛋白酶k處理及有機溶劑提取的相似[7],比其他鹽析程式報道的要高[1,5,7],見表1。
表1 從凍存的和新鮮的凝血以及edta抗凝血中提取的dna的濃度和a260/a280比值(略)
凝膠電泳顯示所有樣本的dna分子量都很高(圖1),而且從兩者的dna樣本中能很容易地擴增出t�pa基因的第8內含子區�alu等位基因二態性(圖2)。這些表明,此方法能有效地從血液中提取出基因組dna。
圖1 抗凝血、凝血和凍存凝血dna提取比較。抗凝血dna(1-2)、凝血dna(3-5)和凍存凝血(6-8)dna瓊脂糖電泳,溴化乙錠染色,紫外分析。m-dna marker(λ�ecot14 i digest, 購自takara)。
(略)圖2 pcr擴增 t�pa 8th 內含子alu等位基因插入/缺失(i/d)二態性結果。lane1、3、6為i/i;lane2為d/d;lane4、5為i/d。(略)
7樓:匿名使用者
加入2mol的nacl溶液,或將粘稠的dna溶於體積分數為95%的酒精中。
病毒dna提取技巧?
8樓:匿名使用者
磁珠法和離心柱法對病毒dna提取各有利弊,對於珍貴樣本用biog病毒dna提取方法獲取的dna純度比較有優勢,對於後續分子檢測還是比較合適的,磁珠法適合大批量樣本的處理,可以直接上儀器做。
9樓:
以下是從動物病毒中快速提取dna的方法,請參考該方案採用離心操作,適合於從動物組織樣品中快速提取病毒基因組dna。以下步驟都在室溫下進行。 1. 取50-100mg的動物組織加入約3倍體積的生理鹽水進行勻漿,充分勻漿後10,000rpm離心2min去除殘餘組織。
2. 取150 μl上清液至新的潔淨離心管中。 3. 加入500 μl dna提取液至上清液中,顛倒混勻,室溫靜置5-10min裂解病毒。 4. 把dna吸附柱裝在2ml收集管中,把裂解後的液體全部轉移至dna吸附柱中,10,000 rpm離心1 min。
5. 倒棄濾液,把dna吸附柱裝**集管中,加入400 μl洗滌液至dna吸附柱中,10,000 rpm離心1 min。注:洗滌液初次使用前請先加入48 ml無水乙醇。
使用完立即蓋上蓋,以防乙醇揮發。 6. 重複步驟5。 7. 倒棄收集管中的濾液,把dna吸附柱裝**集管中,10,000 rpm離心3 min。
8. 把dna吸附柱裝在新的潔淨離心管中,加入30-50 μl洗脫液至吸附柱**,靜置1-2min,10,000 rpm離心1min,所得即為dna溶液,可用於後續實驗,若暫時不用,應於-20 ℃可儲存。
dna抽取的是血液中的哪一部分
10樓:根據
dna抽取的是血液中的白細胞。
血液有血漿和血細胞組成,血漿裡時不含有dna的,而血細胞又包含紅細胞,白細胞,血小板。紅細胞和血小板不含細胞核,所以沒有dna資訊。白細胞中有細胞核,有遺傳資訊,含dna。
11樓:匿名使用者
血液由血漿和血細胞兩部分組成,
血漿呈淡黃色,半透明,血漿中含有大量的水,蛋白質、葡萄糖、無機鹽等,主要功能是運載血細胞,運輸養料和廢物;
血細胞包括紅細胞、白細胞、血小板:成熟的紅細胞無細胞核;未成熟紅細胞可能會有,因為還沒有脫核。白細胞有細胞核,比紅細胞大,數量少;血小板比紅細胞和白細胞都小得多,沒有細胞核。
因此:血液中,dna大多存在白細胞中,少量dna遊離於血漿裡。血小板和成熟紅細胞都沒有dna。
所以 ,血液中提取dna可以用biodai全血(白細胞為主)提取也可以用biodai血清或血漿提取dna。
如何從血液中提取遊離dna
12樓:匿名使用者
高中生物裡邊用的方法
原理:1. dna在nacl溶液中的溶解度,是隨著nacl的濃度的變化而改變的。
當nacl的物質的量濃度為0.14 mol/l時,dna的溶解度最低。利用這一原理,可以使溶解在nacl溶液中的dna析出。
2.dna不溶於酒精溶液,但是細胞中的某些物質則可以溶於酒精溶液。利用這一原理,可以進一步提取出含雜質較少的dna。
3.dna遇二苯胺(沸水浴)會染成藍色,因此,二苯胺可以作為鑑定dna的試劑。
準備工作:
製備雞血細胞液,方法是:將質量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液100ml,置於500 ml燒懷中,注入新鮮的雞血(約180 ml),用玻璃棒攪拌,使其充分混合,以免凝血。
靜置於冰箱內一天,使血細胞自行沉澱。(也可以用離心機離心2 min**速1000轉/分)。用吸管吸去上清液。
方法步驟:
1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌,稍快,稍重。 5 min
2.溶解dna:
3.析出含dna的黏稠物:蒸餾水300ml,逆時針方向攪拌,緩慢
4.過濾:取黏稠物
5.再溶解:順時針方向攪拌,較慢。3 min
6.過濾:取濾液。
7.提取出含雜質較少的dna,逆時針方向攪拌,稍慢。5 min
8.dna的鑑定:沸水浴5min
要是其他用途你就在看看七他人的回答好了。
什麼是DNA變性?使DNA變性的方法有哪些
dna變性是指核酸雙螺旋鹼基對的氫鍵斷裂,雙鏈變成單鏈,從而使核酸的天然構象和性質發生改變。變性時維持雙螺旋穩定性的氫鍵斷裂,鹼基間的堆積力遭到破壞,但不涉及到其一級結構的改變。凡能破壞雙螺旋穩定性的因素,如加熱 極端的ph 有機試劑甲醇 乙醇 尿素及甲醯胺等,均可引起核酸分子變性。變性dna常發生...
基因組DNA製備過程中提取緩衝液有哪些成分,作用是什麼
ste 破壞細胞膜 核膜,分散好的真核生物組織 細胞在含sds和蛋白酶k的溶液中消化分解蛋白質 sds 可使組織蛋白與dna分子分離 edta 能抑制細胞中dnase的活性,使dna分子完整地以可溶形式存在於溶液中 酚 抽提除去蛋白質 氯仿 除去dna溶液中微量酚的汙染 異戊醇 可減少蛋白質變性操作...
如果提取的質粒DNA汙染有少量染色體DNA,你們在操作過程中哪既不最可能出現問題
加入裂解液的時來候顛倒混勻的動自 作幅度bai太大,會導du致基因組dna斷裂成小片段,和zhi質粒混dao在一起。沉澱以後,吸取上清液的時候不小心吸入沉澱,會把夾在沉澱中的基因組dna也一起吸入矽膠吸附柱,這一步的可能性更大,通常都是這一步混入的基因組dna。把問題寫明白了再問效果最最佳。看到你的...