1樓：賀金蘭陽靜
為了防止目的兩端及載體的兩端連線在一起，可以用兩種限制酶切割目的基因兩端，同時也用這兩種限制酶切割載體，這樣就能形成兩種黏性末端，同時也能防止目的基因和載體的自連。
2樓：
如果用單酶切，防止載體自連，可以用鹼性磷酸單酯酶處理載體，而目的基因不作處理。也可以使用不同的酶進行酶切，就不會出現自連問題了。
3樓：匿名使用者
用鹼性磷酸酶處理，他可以使5'端的磷酸集團轉化為羥基，這樣就阻止了基因或載體自身5』端的磷酸基團和3』端的羥基集合形成磷酸二酯鍵，從而防止自連
4樓：
怎樣防止目的基因和載體的自連??????
這是什麼話？目的基因本來就要和載體連呀！
你是不是說怎麼樣防止目的基因自連或載體自連？
這個比較簡單，讓二者的黏性末端儘量長一些撒．再說了，基因或者載體自連的可能性比較小，因為要使二者各自兩端能互補，其概率一般是非常小的．
5樓：匿名使用者
補充一下，如果是用t載體連線的話，讓基因片段的數量為載體的2～10倍，可以有效降低t載自連的概率。
防止是做不到的
怎麼單酶切， 單酶切後 怎麼把目的基因連到已經酶切過的載體上 如何防止自連
6樓：馮婷婷
這個你單酶切最好是要過夜，而且跑電泳儘量時間長一些，如果有一條帶，就說明差不多完全切開了，如果害怕不安全，可以把這條帶切膠**純化，用純化後的連線，自連的可能性會小一些
7樓：
單酶切要想防止自連，最好的辦法是把載體酶切產物脫磷酸。脫了磷酸的載體就無法自連，它只能和目的片段連線。
如果不想脫磷，可以在連線反應體系中加大目的片段的數量，提高陽性克隆的比例，但這不能完全避免自連。
不過最好的辦法還是做雙酶切。單酶切連線實在麻煩。
在基因工程中，用雙酶切目的基因和質粒時怎麼保證目的基因和載體的定向連線？難道不會再出現其他連線嗎？ 5
8樓：
同一種酶切的末端可以相連線在一起，如果質粒的左端和目的基因的左端用同一種酶切，二者的右端用另一種相同的酶切，那麼就可以實現定向連線了。
9樓：匿名使用者
不同的酶切獲得黏性末端不同，不同的黏性末端不能相連，如果直插入一個片段那麼插入片段的方向是確定的。
10樓：劉佩姿
如果只以單酶切割。會使目地基因或質粒自我連線。形成環狀結構。但用雙酶的話就可以避免這個問題啦。
載體去磷酸化後為什麼不能自連但能和目的片段相連
11樓：__姿勢剛剛好
載體去磷酸化後因自身5'端無磷酸基團，因而不可以和自身3'端連線。但是，載體去磷酸化後3』還是有羥基的，可以與目的片段的5'端磷酸基團連線。載體的5'端和目的片斷的3』-oh不能成鍵，因而形成一個雙鏈各有一個切口的雙鏈環狀dna，雙鏈的切口會在轉化入大腸桿菌後，在複製的過程中被修復。
12樓：匿名使用者
鹼性磷酸酶可以去除dna斷裂處的5'端的磷酸基團。
5'端的磷酸基團對於dna連線是必須的，用鹼性磷酸酶處理切開的載體後，載體不能在dna連線酶的作用下自連，而目的基因片段兩端是有5'端的磷酸基團的，可以在dna連線酶的作用下與載體連線。
所以鹼性磷酸酶處理可以防止質粒載體dna自連的作用。
為什麼鹼性磷酸酶處理可以防止質粒載體dna自連的作用
13樓：匡雅霜
鹼性磷酸酶可以去除dna斷裂處的5'端的磷酸基團。
5'端的磷酸基團對於dna連線是必須的，用鹼性磷酸酶處理切開的載體後，載體不能在dna連線酶的作用下自連，而目的基因片段兩端是有5'端的磷酸基團的，可以在dna連線酶的作用下與載體連線。
如何確定目的基因的啟動子，啟動子和目的基因有對應關係麼
定義 啟動子是參與特定基因轉錄及其調控的dna序列。包含核心啟動子區域和調控區域。核心啟動子區域產生基礎水平的轉錄，調控區域能夠對不同的環境條件作出應答，對基因的表達水平做出相應的調節。區域 啟動子的範圍非常大，可以包含轉錄起始位點上游2000bp，有些特定基因的轉錄區內部也存在著轉錄因子的結合位點...
帶有目的基因的質粒怎樣匯入受體細胞
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