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補體測e68a8462616964757a686964616f31333337383931定
第一節 補體的性質與活化途徑
一、補體的性質
補體(***plement,c):是一組存在於人和脊椎動物(vertebrates)血清及組織液中具有酶樣活性、不耐熱和功能上連續反應的糖蛋白,是抗體發揮溶細胞作用的必要補充條件,故稱為補體。
補體系統的功能:
廣泛參與機體的抗感染防禦反應,
介導細胞溶解,
調理吞噬,
免疫黏附,
參與炎症反應引起機體免疫損傷等
補體按其性質與功能分為三類,即
• 1補體系統的固有成分,共9種,按先後次序分別命名為c1-c9 2調節和控制補體系統活化的成分,多以其功能命名,如c1抑制物
3補體受體(cr),以其結合物件來命名
二、補體的活化途徑
經典途徑
替代途徑
mbl途徑
(一)補體啟用的經典途徑
是以igg(1,2,3)或igm類抗體結合抗原後的免疫複合物為主要啟用劑,啟用過程從c1q開始,補體c1~c9共11種成分全部參與的活化途徑。
二)補體啟用的替代途徑
補體啟用的替代途徑又稱旁路途徑,與經典途徑不同之處在於啟用與抗原體複合物
無關,是非特異性的,沒有c1,c4和c2參與,直接啟用c3,完成c5~c9的啟用過程
血清總補體活性測定(ch50試驗)
(一)實驗原理
補體最主要的活性是溶細胞作用,這種活性很容易通過溶血反應進行檢測。在一個適當的、穩定的反應系統中,溶血反應對補體的劑量依賴呈一個特殊的s形曲線。在輕微溶血和接近完全溶血時,補體量的變化不能使溶血程度有顯著改變,即溶血對補體量的變化不敏感。
但在半溶血(50%溶血)上下時曲線最陡,即使補體含量僅有較小變動時,溶血程度也會發生較大的改變,也就是說對補體量的變化非常敏感。故採用50%溶血作為終點指標要比100%溶血敏感得多,這一方法稱為補體50%溶血(***plement hemolysis 50%),簡稱為ch50。
二)試驗方法
1、綿羊rbc:濃度一般為2%~5%
2、溶血素:即抗綿羊rbc抗體,試驗前應在56°C加熱30min或60 °C加熱30min以滅活補體
3、稀釋緩衝液:磷酸緩衝液或巴比妥緩衝液
4、50%溶血標準管:
5、取新鮮血清標本進行試驗。按的要求在各管中加入試劑和反應物,一起放37°C水浴箱中溫育30min。
溫育後將所有試管2500r/min離心5min,通過觀察比較,選擇溶血程度與標準管相近的兩管在分光光度計上分別讀取吸光度,以最接近標準管的那一管定為最高有效反應管,取其稀釋倍數代入下列公式,求得ch50的測定值(單位u)。
每毫升血清總補體活性(單位)= 1/血清用量×稀釋倍數
三)方法評價
ch50試驗測定的是經典途徑總補體溶血活性,所反應的是補體9種成分的綜合水平。 方法簡便、快速,但敏感性低,補體的溶血活性除與試驗中反應體積成反比外,還與反應所用緩衝液的ph、離子強度、鈣鎂濃度、srbc數量和反應溫度有一定關係。
鈣鎂離子可穩定溶血系統,但過量反而抑制溶血反應。
單個補體成分的測定
一、免疫溶血法
二、免疫化學法
補體結合試驗
補體結合試驗(***plement fixation test,cft)是用免疫溶血機制做指示系統,來檢測另一反應系統抗原或抗體的試驗。早在2023年wasermann就將其應用於梅毒的診斷,即著名的華氏反應。 這一傳統的試驗經不斷改進,除了用於傳染病診斷和流行病學調查以外,在一些自身抗體、腫瘤相關以原以及hla的檢測和分析中也有應用。
一、試驗原理
該試驗中有5種成分參與反應,分屬於3個系統: 1反應系統,即已知的抗原(或抗體)與待測的抗體(或抗原);
2補體系統;
3指示系統,即srbc與相應溶血素,試驗時常將其預先結合在一起,形成致敏紅細胞。 反應系統與指示系統爭奪補體系統,先加入反應系統給其以優先結合補體的機會。
二、試驗方法
補體結合試驗的改良方法較多,較常用的有全量法(3ml)、半量法(1.5ml)、小量法(0.6ml)和微量法(塑板法)等。
目前以後兩種方法應用較為廣泛,因為可以節省抗原,血清標本用量較少,特異性也較好。以下敘述以小量法為例,即抗原、抗體、溶血素、羊紅細胞各加0.1ml,補體加0.
2ml,總量為0.6ml。
(一)試劑
1.抗原:試驗中用於檢測抗體的抗原應適當提純,純度愈高,特異性愈強。如使用粗製抗原時,須經同樣處理的正常組織作抗原對照,以識別待檢血清中可能存在的、對正常組織成分的非特異性反應。
2.抗原和抗本的滴定:補體結合試驗中,抗原與抗體按一定比例結合,因而應通過試驗選擇適宜的濃度比例。多采用方陣法進行滴定,選擇抗原與抗體兩者都呈強陽性反應(100%不溶血)的最高稀釋度作為抗原和抗體的效價(單位)。
3、補體的滴定:一般用豚鼠補體,補體滴定9逐步加入各試劑,溫育後觀察最少量補體能產生完全溶血者,確定為1個實用單位,正式試驗中使用2個實用單位。
(二)血清標本
採集血液標本後及時分離血清,及時檢驗或將血清儲存於-20°C。血清在試驗前應先加熱56°C30min(或60°C3min)以破壞補體和除去一些非特異因素。
血清標本遇有抗補本現象時可做下列處理之一:1加熱提高12 °C ;
2-20°C凍融後離心去沉澱;
3以3mmol/l鹽酸處理;
4加入少量補體後再加熱滅活;
5以白陶土處理;
6通入co2;
7以小白鼠肝粉處理;
8用含10%新鮮雞蛋清的生理鹽水稀釋補體。
(三)正式試驗
以小量法測定抗體的補體結合試驗為例。逐步加入各種試劑,溫育後先觀察各類對照管,應與預期的結果吻合。
三、方法評價
補體結合試驗是一種傳統的免疫學技術,能夠沿用至今說明它本身有一定的優點:1靈敏度高。補體活化過程有放大作用,比沉澱反應和凝集反應的靈敏度高得多,能測定0.
05μg/ml的抗體,可與間接凝集法的靈敏度相當。2特異性強。各種反應成分事先都經過滴定,選擇了最佳比例,出現交叉反應的機率較小,尤其用小量法或微量法時。
3應用面廣,可用於檢測多種型別的抗原或抗體。4易於普及,試驗結果顯而易見;試驗條件要求低,不需要特殊儀器或只用光電比色計即可。
如何檢測磁粉制動器中磁粉的存在，如何確定磁粉制動器力矩？
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補體的滅活
補體系bai 統 plement system 一組存在於人和脊椎du動物正常新鮮血zhi清中dao的非特異性球蛋白。它與版酶活性有關。19世紀末,權在研究免疫溶菌和免疫溶血反應中,認為這種球蛋白是對抗體的溶細胞有輔助作用的物質,因而得名補體。補體由9種成分組成,分別命名為 c1 c2 c3 c9。...
補體的生物學功能，簡述補體的生物學作用？
1.溶解靶細胞 所有型別的細胞 有包膜病毒 2.促進吞噬 激肽樣作用 c2a，使血管通透性增加 過敏毒素 c3a,c5a,使吞噬細胞易透過血管壁趨化因子 c3a,c5a,c5b67使吞噬細胞集中於抗原周圍 免疫調理 補體裂解產物 c3b c4b 與病原性微生物結合後，可促進吞噬細胞對其吞噬 免疫粘附...