1樓:佰草集
實驗結果
不能肯定來的說明結果是成功源
的,做bai實驗的陰性對照也很du重要,陰性zhi對照必須做出陰性結果。如樓dao下的網友所說,可能是你的感受態菌被質粒汙染了。現在我回答一下你的 追問吧:
「未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出單菌落」,那麼這個長出的單菌落你有沒有做菌落pcr的鑑定?如果你沒有做菌落pcr的鑑定,還有一種可能就是你的板子上的抗生素濃度不夠,導致長出了菌,這個菌到底含不含有你的目的質粒,要做pcr鑑定,不要光看菌落長出與否。建議你把板子的抗生素濃度提高,同時看看未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出的單菌落的pcr鑑定結果,從而判斷是否僅僅是感受態被質粒汙染了
2樓:匿名使用者
感受態可能被其它帶有這種抗生素抗性的質粒汙染了,制感受態的時候注意挑取單菌落,建議你重製,不然下游反應或是測序可能受影響
3樓:匿名使用者
不一定 建議重新做一下
農桿菌感受態細胞製備失敗和質粒沒有轉進去的可能原因
4樓:匿名使用者
1.你到底是 感受態沒製備好呢?還是轉化了,但平板上沒克隆呢?
2.你轉一個有人轉成功過的試試,排除感受態和你自己操作是不是有問題?
3.你用的是 哪種菌啊?lba4404?gv3101? 3抗有沒有+錯啊?
4.你是電擊?熱擊?
農桿菌轉化後菌落pcr就是不出目的條帶,求助
5樓:匿名使用者
沒有轉化成功;
調整pcr條件;
提取質粒後再pcr。
感受態細菌轉化後在氨苄板上培養12個小時,板上長出菌了,挑菌後搖菌
6樓:愛小腿子
實驗結果不能肯定的說明結果是成功的,做實驗的陰性對照也很重要,陰性對照必須做出陰性結果。如樓下的網友所說,可能是你的感受態菌被質粒汙染了。現在我回答一下你的 追問吧:
「未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出單菌落」,那麼這個長出的單菌落你有沒有做菌落pcr的鑑定?如果你沒有做菌落pcr的鑑定,還有一種可能就是你的板子上的抗生素濃度不夠,導致長出了菌,這個菌到底含不含有你的目的質粒,要做pcr鑑定,不要光看菌落長出與否。建議你把板子的抗生素濃度提高,同時看看未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出的單菌落的pcr鑑定結果,從而判斷是否僅僅是感受態被質粒汙染了
感受態細胞的製備時有什麼注意事項
7樓:天寂無痕
1、培養溫度。較低的溫度培養有利於感受態的形成,這樣可以獲得較高的感受態,但太低又不實用,因而產生了 inoue 的高效感受態製備方法,它實際是利用了所有有利於感受態的文獻而得出的一
個非常理想方法。
2、在儲存感受態時,dmso 要比甘油的效果要好,它會使感受態的效率增加。
3、液氮速凍也會使感受態的效率提高,因此推薦用液氮速凍感受態,然後儲存於超低溫冰箱內。
4、凍存的感受態用一次拿一管,不要反覆凍融。化凍之後立即使用,不要冰上放太久。
5、操作時可以輕彈輕甩,儘量避免用移液器吹吸。
8樓:y神級第六人
(1)質粒dna的質量和濃度:
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的,轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比,但當加入的外源dna的量過多或體積過大時,則會使轉化率下降。一般地,dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%,1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言,分子量大的轉化效率低,實驗證明,大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外,重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關,環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍,因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
(2)感受態細胞的質量:
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的,並用最純淨的水配製,最好分裝儲存於4°C
(3)細胞的生長狀態和密度
最好從-70°C或-20°C甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接,及貯存在4°C的培養菌液。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌,可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株,od600為0.5時,細胞密度在5×107個/ml左右。(應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同)。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
(二)感受態細胞轉化中的影響:
整個操作過程均應在無菌條件下進行,所用器皿,如離心管,移液槍頭等最好是新的,並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌,且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染,否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行,不能離開冰浴,否則細胞轉化率將會降低。
農桿菌的感受態細胞裡帶有ti質粒嗎
9樓:匿名使用者
農桿菌之所以被用於轉基因工程,就是其含有ti質粒,ti質粒上的t-dna上有8個左右的回
基因在植物細答胞內表達,農桿菌通過侵染植物傷口進入細胞後,可將t-dna插入到植物基因組中。因此,可以通過將目的基因插入到經過改造的t-dna區,藉助農桿菌的感染實現外源基因向植物細胞的轉移和整合,然後通過細胞和組織培養技術,得到轉基因植物。
根瘤農桿菌感受態製作時汙染是怎麼回事?轉化質粒進去後,長出後是白色不透明的菌落,都不像是農桿菌。
10樓:匿名使用者
你直接拿沒有切的質粒去轉化塗板 看有沒有長 如果長了就是連線的問題 如果沒長就是感受態的問題
豬皮凍的做法，製作肉皮凍的方法
糖醋皮凍的做法 主料 豬皮500克 輔料 薑片10克,精鹽5克,味精3克,紅糖100克,生抽5克,料酒50克,米醋20克。做法 1 將豬皮去毛，刮盡油脂，洗淨，備用。2 將豬皮放入鍋中，加入薑片 適量的水，燒沸後撇去浮沫，倒入料酒，煮至酥爛後取出，用絞肉機絞碎，再放入湯汁中，加入精鹽 紅糖調味，再燜...
用四種方法制備MgSO4 ZnCl2謝謝了
四種方法制備mgso4 1 鎂跟稀硫酸反應 2 氧化鎂跟稀硫酸反應 3 氫氧化鎂跟稀硫酸反應 4 碳酸鎂跟稀硫酸反應 四種方法制備zncl2 1 鋅跟稀鹽酸反應 2 氧化鋅跟稀鹽酸反應 3 氫氧化鋅跟稀鹽酸反應 4 碳酸鋅跟稀鹽酸反應。製備zncl2 zn cl2 點燃 zncl2 zn oh 2 ...
融氏王老蜂農松花粉豆對身體有什麼作用
效果還是很不錯的。松花粉豆是生長在海拔1100 1500米山區的中國鄉土樹種 馬尾松和油松的花內 粉，與蜂源花粉相比，松花粉為人工採集，具有花源單一 品質純淨 成份穩定，無農藥殘留物，不含動物激素等特點。鬆容花粉較其它任何一種植物花粉口感均好，服用時感到有淡淡香味。古人稱 松柏之氣可以使人長壽！所以...