1樓:中國農業出版社
(嶽德超、冉硯珠)
蜜環菌〔armillaria mellea(vahl ex fr.)ouél.〕別名蜜環蕈、榛蘑。
屬擔子菌亞門、層菌綱、無隔擔子菌亞綱、傘菌目、口蘑科,蜜環菌屬。子實體為一年生,是食、藥兼用真菌,亦是為害森林的根腐病病原菌。全世界均有分佈。
我國主要分佈於黑龍江、吉林、遼寧、河北、河南、山西、山東、甘肅、陝西、青海、新疆、四川、安徽、浙江、湖南、湖北、雲南、貴州、內蒙古、**及臺灣等省區。子實體、菌索和菌絲體均可入藥。性溫、味甘。
子實體含有甘露醇、卵磷脂、麥角甾醇、維生素a(含量高)、b1、b2、c、pp及多種氨基酸,其中以天門冬氨酸、穀氨酸和亮氨酸含量最高(其菌索、發酵菌絲體及天麻亦是上述各種氨基酸含量最高,見表21—9。具有祛風活絡,強筋壯骨等功能。用於**腰腿痛、癲癇等疾病。
並可預防視力減退、夜盲症、**乾燥等。目前,貴州省科學院植物園及山東省棲霞縣人工栽培已獲成功。中國醫學科學院藥物研究所鑑於蜜環菌與天麻的特殊關係,2023年發酵生產蜜環菌代替天麻應用於臨床也已獲得成功,並通過成果鑑定。
現全國已有幾家藥廠生產。蜜環菌發酵物在所用劑量下具有與天麻相同的生物活性,如對中樞神經有鎮靜及抗驚作用,能改善血液迴圈,增加腦及冠狀動脈血流量等。臨床觀察結果證明,對不同**(高血壓、椎基底動脈供血不足、美尼爾氏症、植物神經功能紊亂和陰虛陽亢型病人)引起的眩暈症狀的療效與天麻相似,對神經衰弱、失眠、耳鳴、肢麻及癲癇、腦動脈硬化等疾病也有一定療效。
從其發酵物中提取分離得到甘露醇、蜜環菌甲素、蜜環菌乙素、尿嘧啶、尿苷、赤鮮醇、阿糖醇及與天麻成分相同的腺嘌呤、腺苷、蔗糖、羥甲基糠醛、十八酸甲脂等。
表21—9 蜜環菌與天麻氨基酸含量測定
* 分析結果:均以穀氨酸最高,其次為天冬氨酸和亮氨酸,蛋氨酸含量最低。
分析儀器:835-50氨基酸自動分析儀。
一、形態特徵
(一)子實體
夏秋季多叢生於老樹樁或死樹的基部,也能寄生於活樹上。菌體高約10—15cm,菌蓋肉質,半球形後變平展,有時稍呈臍狀,直徑5—12cm,蜜黃色或淺土黃色,**部稍暗,表面多布以小鱗片或叢捲毛狀鱗片或完全平滑,邊緣多波浪形,具有放射狀條紋,菌柄長10—15cm,粗6—18mm,圓柱形稍彎曲,有時基部稍膨大(瓶栽基部不發達),纖維質,內部鬆軟,後期中空,淺褐色,菌環白色生柄上部或不明顯,鬆軟,菌柄基部與根狀菌索相連,菌褶貼生至延生,近白色,孢子印白色,孢子無色光滑,橢圓形,8—9.5×5.
5—6.5μm。
(二)菌絲體
以菌絲、菌球、分叉菌體及菌索等形式存在。
1.菌絲
顯微鏡觀察,菌絲無色透明,具橫隔膜的絲狀體,不形成鎖狀聯合。純培養中,初為白色絨毯狀,以後逐漸為鏽黃色、棕紅色,老化時呈黑褐色,此時菌體質脆而薄,表面有皺紋,有時菌體上長出駝色捲曲絨毛狀菌絲叢。菌絲自長出至老化前在暗處可見到熒光,白色菌絲熒光最強。
菌絲常侵入樹根或老樹幹的組織,導致樹木腐朽。
2.菌球及分叉菌體
搖瓶培養中,菌絲體的形態多呈刺球狀或不規則的分叉菌體,菌球體大小約3—7mm,中微空,淺褐色。菌球及分叉菌體在暗處均具有熒光,4—5天亮度最強,7天以後逐漸減弱。
3.菌索
是組織化菌絲,由無數白色或白黃色平行細長的菌絲扭結形成的根狀結構。外面包有一層鞘,幼嫩時為白色,以後逐漸變為棕紅色,尖端生長點白色或白黃色,老化時變為黑褐色,最長可達數米,分叉。在純培養中,伸向基質中的菌索不變色或變色慢,基質外面的菌索則變色快,幼嫩時白色質脆,在暗處可見熒光,老化後則較堅韌,呈黑褐色,顯微鏡觀察,菌索表面著生短的菌絲,具橫隔膜,有時在菌絲周圍可見到無色棒狀結晶體(圖21—15)。
圖21—15 蜜環菌形態圖
1.子實體 2.子實體縱切面 3.孢子
二、生物學特性
蜜環菌常見於夏秋季,多成叢腐生於老樹樁及死樹基部,或寄生在活樹上。它能侵害200多種樹木,常見者為鬆、雲杉、冷杉、落葉松及其它闊葉樹,在鳳仙花、芍藥、美國人蔘、食用大黃、甘蔗、草莓以及馬鈴薯等草本植物上亦發現有蜜環菌的寄生或腐生。
(一)溫度
據roit**a(1932)報道,蜜環菌的菌絲體在某種培養基中,保持散光狀態,在18—22℃條件下,經過3—4個月可形成子實體。李良生等(1987)報道,在我國一般12—20℃條件下均能形成子實體,而最適溫度為15—18℃。
菌絲體在5—30℃之間均可生長,但以24—27℃最為適宜。在15—28℃條件下均能形成菌索,而以25℃為宜。蜜環菌菌絲體在10—30℃之間均可發光,以24—28℃發光最強。
超過37℃則失去發光能力。
(二)空氣
蜜環菌是好氣性真菌,通氣良好才能很好生長。深層發酵培養過程中,亦需通氣攪拌給以適當的空氣。
(三)溼度
蜜環菌的生長髮育需要充足的水分和很高的空氣溼度,基質中含水量50—60%,空氣相對溼度80%時菌絲體生長最好。形成子實體需要保持空氣相對溼度在85—95%之間。
(四)酸鹼度
蜜環菌在ph4—7均能生長,但以ph6左右為宜。
(五)光照
光照抑制蜜環菌的生長。菌絲及菌索生長時不需要光照,形成子實體需要散射光。李良生等報道,在人工培育過程中無需直射光,一般100—500lx均能良好地生長並形成子實體。
(六)營養
蜜環菌是兼性寄生真菌,既可在倒木或樹樁上營腐生生活,又可寄生在活樹上。培育子實體可因地制宜採用棉籽殼、玉米芯、鋸木屑、麥麩、米糠等。液體培養菌絲體,碳源以葡萄糖為好,氮源以蠶蛹粉、蛋白腖為好。
三、栽培技術
蜜環菌子實體的栽培技術方面的文獻報道極少。目前,只有山東李良生等(1988)報道人工栽培蜜環菌已獲得成功,但尚未推廣。而以發酵方法生產蜜環菌菌絲體已於70年代就獲得成功,並應用於臨床,已取得較大的社會效益和經濟效益。
(一)菌磚栽培蜜環菌子實體
1.培養基的製備
新鮮棉籽殼曝晒2—3天,取棉籽殼100kg,加入玉米粉渣20kg,石膏1kg,磷肥1kg,多菌靈0.15kg,含水量掌握在拌勻後以手緊握,指間有水滴出1—2滴為宜。ph值6.
5。2.播種前準備
活動模具58×45×12cm,塑料布100cm2。栽培室內外用ph值12以上生石灰水刷洗乾淨,一切用具與塑料布均需在0.1%的高錳酸鉀液中浸泡3—5分鐘。
3.播種
將塑料襯放在活動模具內,把拌好的棉籽殼堆放在塑料布上,約6cm高,撒上一層菌種,再添一層料,撒一層菌種,共撒3層料3層菌種,在培養料的四角及**埋上大塊菌種,表面撒一層碎菌種,適當壓實,整平,蓋上報紙,用塑料布包好,再用小木板壓緊,即成菌磚。
4.菌絲生長期的管理
在22—28℃菌絲均能生長,但以25℃為宜,故此階段溫度應控制在24—26℃之間。播種後24小時萌動,48小時似吃料塊,7天后潔白的菌絲可佈滿料面,這時應每天早晚揭膜通風。25天可發透,即轉入分化期。
5.子實體生長期管理
試驗中發現蜜環菌在2—20℃條件下均能產生子實體,但以15—18℃生長最快。空氣相對溼度應保持在85—95%之間,嚴禁直射光照,在100—500lx光照下均生長良好。3—5天即可採收。
收完一批子實體後,將菌磚晾2—3天,表幹內溼,含水量在50%左右,再噴營養液,直至菌磚的含水量達到70%左右,蓋好塑料布,3—5天可形成菌蕾,共可收5批。
營養液的配製:葡萄糖250g,酵母片300片,維生素b1100片,以適量水溶化,再加水至50kg,水溫25—30℃。
按上述製作方法,15塊菌磚共收穫蜜環菌子實體37.25kg。
蜜環菌子實體春秋兩季均可生產。從種到收完5批僅需45—50天。
6.採收加工
當菌蓋長至八成開時,即應採收。先於陽光下翻晒,待子實體稍幹後,再於60—65℃下烘烤,並勤翻動,直至菌柄和菌蓋都已烤乾,即可裝入塑料袋中,再放入紙箱(或木箱)中,儲存於陰涼乾燥處。
另外亦有采用栽培過天麻2—4年的廢菌材培養子實體的方法。
(二)發酵生產蜜環菌菌絲體
70年代中國醫學科學院藥物研究所,已成功地應用發酵方法生產蜜環菌製劑。發酵生產蜜環菌方法可分液體發酵和固體發酵兩種。
1.液體發酵
(1)液體發酵生產工藝流程
(2)培養基的製備
①斜面培養基:可採用pda培養基。②種子培養基s麥麩50g煮汁,葡萄糖20g,磷酸二氫鉀1.
5g,硫酸鎂0.75g,維生素b110mg(或不加)溶化後加自來水至1000ml,ph自然(6—6.2)。
500ml三角瓶,每瓶加入蠶蛹粉0.5g,上述培養基100ml為一級種子培養基或5000ml三角瓶裝1000ml培養基,蠶蛹粉5g為二級種子培養基。③發酵培養基:
葡萄糖1%,蔗糖2%,豆餅粉1%,蠶蛹粉1%,磷酸二氫鉀0.15%,硫酸鎂0.075%,自來水,ph自然。
上述各種培養基均在121℃下蒸汽滅菌30分鐘。
(3)培養①斜面培養:新轉管斜面在25—26℃下培養15—20天即可長好備用。這時菌絲呈棕紅色,邊緣呈白色,在暗處顯熒光,表面有皺紋,有時長出稍捲曲駝色氣生菌絲叢,背面能見到長入培養基中的白黃色根狀菌索,長出培養基外的根狀菌索老化後呈黑褐色。
②種子培養:一級種子培養,以一支斜面菌種接一瓶種子培養基,在25—26℃下振盪培養5—6天。二級種子培養,以一級種子一瓶接入二級種子培養基中,振盪培養3—4天。
**種子是在種子罐內進行的擴大種子培養。一般40l罐,投料25—30l,以121℃滅菌半小時,冷卻後以5—10%接種量,26—28℃攪拌通氣培養,攪拌速度為150—180轉/min,通氣量1∶0.3—1∶0.
5(v/v/min),培養96—120小時即可生長好備用。③發酵培養:是在發酵罐中進行通氣攪拌培養。
接種量10%,發酵條件同種子罐種子培養條件。培養7—9天,發酵液變為棕紫褐色,菌絲較密,即可出罐。④採收:
發酵完畢,採用離心機或板框過濾,濾液減壓濃縮至膏狀,與菌這體混合,於65—75℃下烤乾,粉碎,質檢,壓片。
(4)菌種保藏
蜜環菌可以採用低溫保藏法,於4—5℃下可保藏8個月到1年。但用時需重新轉管。
2.固體發酵培養
其斜面培養、種子培養等方法和條件同液體發酵。
(1)固體發酵培養基的製備
於500ml克氏瓶(或罐頭瓶)中裝入玉米粉20g,麥麩20g,自來水90ml,充分搖勻,於1kg/cm2下滅菌30分鐘後趁熱攤平,備用。
(2)固體發酵培養
以二級種子接種固體培養基,每瓶接種量為10—20ml,視表面積大小而定,搖勻後置於25—27℃下培養3天左右,蜜環菌即開始生長,8—10天菌絲體可長滿培養基的表面,15—20天菌絲體即可伸入整個培養基,並形成菌索,在暗處可見到熒光,顏色由白逐漸變為黃色、鏽黃色、棕褐色,到25—30天之間呈褐黑色,此時已老熟,即可採收。
(3)採收
成熟後從瓶內取出晾乾再烤。乾燥溫度及其它程式同液體發酵生產方法。
目前,全國共有10個藥廠進行液體發酵生產,其規模最小的發酵罐為3t,最大的為20t,兩個藥廠進行固體發酵生產。除片劑外,亦生產沖劑和口服液。除滿足國內需要外,尚有部分出口。
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