1樓:匿名使用者
1. 細胞培養:取對數生長期的細胞,按1×106cells/ ml以1ml接種24孔板或2ml接種於6孔板內,進行所需的回處理(比如加入藥答物),特定時間後終止培養,進行下一步的實驗。
2. 細胞固定: 800rpm離心5min,收集細胞沉澱,棄上清,用預冷pbs洗滌兩次,加入預冷75%乙醇,於4℃固定4h以上。
3. 細胞染色:1500rpm離心5min,棄上清,以3ml的pbs洗滌一次,加入400ul溴化乙錠(pi,50ug/ml),100ul rnase a(100ug/ml ),4℃避光孵育30min。
4. 流式分析: 以標準程式用流式細胞儀檢測,一般計數2~3萬個細胞,結果用細胞週期擬和軟體modfit分析。
細胞週期是指能持續**的真核細胞從一次有絲**結束後生長,再到下一次**結束的迴圈過程。細胞週期的長短反映了細胞所處狀態,這是一個細胞物質積累與細胞**的迴圈過程。癌變的細胞以及特定階段的胚胎細胞常常有異常的**週期。
2樓:匿名使用者
1、 0.25%胰酶(無edta)消來化,將細胞消化成單源個。(必須消化成單個)。
2、離心收集細胞,棄上清,用預冷pbs洗細胞兩次(加3ml,吹懸,離心,棄上清算洗一次)。
3、加入3ml預冷(-20度)70%乙醇到細胞沉澱中,於4度固定過夜(或者,如果實驗週期長可以-20℃長期固定)。
4、離心收集細胞,以3ml的pbs洗細胞兩次,加入500ulpbs含50ug/ml溴化乙錠(pi),100ug/ml rnase a, 0.2% triton x-100, 4℃避光孵育30分鐘。
5、送實驗室,上機
3樓:周婷金偉
1、 0.25%胰酶(無baiedta)消化,將du
細胞消化成zhi單個。(必須消化成單個)。2、離心dao收集細胞,棄上清,專用預冷pbs洗細胞兩次(屬加3ml,吹懸,離心,棄上清算洗一次)。
3、加入3ml預冷(-20度)70%乙醇到細胞沉澱中,於4度固定過夜(或者,如果實驗週期長可以-20℃長期固定)。4、離心收集細胞,以3ml的pbs洗細胞兩次,加入500ulpbs含50ug/ml溴化乙錠(pi),100ug/ml rnase a, 0.2% triton x-100, 4℃避光孵育30分鐘(pi我是直接用pbs配成工作濃度,然後加入細胞沉澱混勻,rna酶現加,但有時不加發現對實驗結果也沒太大的影響)。
5、送6樓中心實驗室,上機
細胞週期檢測方法即pi法的操作步驟
4樓:匿名使用者
1. 細胞培養:取對數bai生長期的du細胞,按1×106cells/ ml以1ml接種zhi24孔板或2ml接種於6孔板內,進dao行所需的處理(
版比如加入藥物),特定時權間後終止培養,進行下一步的實驗。
2. 細胞固定: 800rpm離心5min,收集細胞沉澱,棄上清,用預冷pbs洗滌兩次,加入預冷75%乙醇,於4℃固定4h以上。
3. 細胞染色:1500rpm離心5min,棄上清,以3ml的pbs洗滌一次,加入400ul溴化乙錠(pi,50ug/ml),100ul rnase a(100ug/ml ),4℃避光孵育30min。
4. 流式分析: 以標準程式用流式細胞儀檢測,一般計數2~3萬個細胞,結果用細胞週期擬和軟體modfit分析。
細胞週期是指能持續**的真核細胞從一次有絲**結束後生長,再到下一次**結束的迴圈過程。細胞週期的長短反映了細胞所處狀態,這是一個細胞物質積累與細胞**的迴圈過程。癌變的細胞以及特定階段的胚胎細胞常常有異常的**週期。
什麼是細胞週期何謂細胞週期細胞週期分為哪幾個時期其基本特徵是什麼
細胞週期是可再生細胞從準備時期到 為兩個細胞的一個迴圈階段。細胞週期分為細胞間期和細胞 期,細胞間期較長,而細胞 期較短。細胞間期是為細胞 的準備時期,表現為細胞增大,營養物質增多。細胞 期則是一個細胞由兩個細胞分解為一個細胞的過程 其中的過程很複雜,而且分好幾個時期,在這裡只簡述一下 就是連續 的...
細胞凋亡細胞週期會變短嗎?為什麼
細胞凋亡細胞週期會變長。因為細胞凋亡,代謝緩慢,其細胞週期相對變長,甚至不 細胞週期是一次 結束到下一次 結束的時間段。細胞凋亡指細胞程式性死亡,受基因控制。當細胞即將凋亡時,溶酶體膜消失,其中的多種水解酶進入細胞中,並逐漸將細胞分解,最後細胞死亡。細胞凋亡的啟動是細胞在感受到相應的訊號刺激後胞內一...
無細胞週期的細胞也有中心體
浦恐 中心體並不決定細胞週期。細胞週期是靠細胞週期決定因子及ctk激酶體系來控制的。 三劍客之 中心體只有動物和低等植物有,有些低等植物沒有細胞週期,不過。它卻有中心體。 k高人 二者無關,高等動物與某些低等植物有中心體,而且一直有 黎魁 沒有吧, 看看吧http baike.baidu.com v...