1樓:竹葉_卿
主要兩個作用:殺死細菌;使菌體與玻片粘附牢固(染色水洗時不易沖掉)。
2樓:匿名使用者
簡單染色
法:利用單一染料對細菌進行染色的一種方法.例如番紅.
1.塗片:用灼燒滅菌冷卻後的接種環挑取少量菌體與水滴充分混勻,塗成極薄的菌膜.
2.乾燥:可自然晾乾,或將塗片置於火焰高處微熱烘乾,但不能直接在火焰上烘烤.
3.固定:手執玻片一端,有菌膜的一面朝上,通過迅速通過火焰2-3次(用手指觸塗片反面,以不燙手為宜).
4.染色:加適量(以蓋滿菌膜為度)結晶紫染色液(或石炭酸復紅液),染l~2min.
5.水洗:用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止.
6.乾燥
7.鏡檢
復染色:利用用兩種以上染料對細菌進行染色.例如革蘭氏染色法.
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,需要鹼性染料(basic dye)初染液;媒染劑(mordant);脫色劑(decolorising agent)和復染液(counterstain).
微生物實驗中為什麼細菌在染色前需要固定?
3樓:晴晴
一:殺死細胞,是染料易於著色。
二:使細菌附著於玻片上,不易被水沖掉。
在固定時,是要慢慢晾乾,如果得確要加快速度,可以處於酒精燈火焰上部遠處稍微烘幾下,切忌烘得玻片升溫,否則有可能會破壞細菌生命形態
細菌的革蘭氏染色與顯微觀察
一、 實驗原理
革蘭氏染色原理:細菌對於革蘭氏染色的不同反應,是由於它們細胞壁的成分和結構不同造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由肽聚糖形成的網狀結,當用乙醇處理時,由於脫水而引發網狀結構的孔徑變小,通透性降低,從而使結晶紫-碘的複合物不易被洗脫而保留在細胞內,經脫色和復染後仍保留初染劑的藍紫色。
革蘭氏陰性菌的細胞壁肽聚糖層較薄、類脂含量高,所以當脫色處理時,類脂質被乙醇(或丙酮)溶解,細胞壁透性增大,使結晶紫-碘的複合物比較容易被洗脫出來,用復染劑復染後,細胞被染上覆染劑的紅色。 顯微鏡成像原理:現代普通光學顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統來放大成像,故又常 被稱為複式顯微鏡。
顯微鏡的光學系統中,物鏡的效能最為關鍵,油鏡的放大倍數最大,對微生物學研究最為重要。在載玻片與鏡頭之間加滴鏡油主要是為了增加照明亮度和增加顯微鏡的解析度。以油代替空氣作為光的傳播介質,減少光線的折射或全反射,使觀察到的像更加清晰。
二、 實驗器材
1. 菌落:
大腸桿菌24h營養瓊脂斜面培養物、
金黃色葡萄球菌約24h營養瓊脂斜面培養物、 枯草芽孢桿菌12~18h營養瓊脂斜面培養物。
2. 溶液或試劑:
蒸餾水、碘液、結晶紫染色液、95%酒精、番紅染色液、香柏油。 3. 儀器:
顯微鏡、載玻片、接種環、酒精燈、鑷子、擦鏡紙。
三、 實驗步驟
革蘭氏染色:
1. 塗片
取出載玻片,點燃載玻片,燃盡載玻片上的酒精和滅菌,在中間輕輕點一小滴蒸餾水,用接種環在試管的斜面培養基上,輕輕挑取少量菌體,整個過程試管口都要處在酒精燈的上方,而且速度要快,以防汙染培養基。然後在載玻片的小水滴以轉圈的動作塗片,待水滴混濁後停住,等其乾燥、固定。
2. 初染
滴加結晶紫(以剛好將菌膜覆蓋為宜)於菌落上,染色1~2min ,傾去染色液,有細水從載玻片上方向下衝洗,至洗出液為無色,將載玻片上水甩淨。
3. 媒染
滴加碘液衝去殘水,並覆蓋約1min,水洗。
4. 脫色
將載玻片上面的水甩淨,將載玻片傾斜,在白色背景下,用滴管加95%的酒精脫色,直至流出的酒精剛好不出現藍色,立即用水衝淨酒精,將載玻片上水甩淨。
5. 復染
用番紅液復染約1~2min,水洗,然後再吸水紙吸乾
6. 鏡檢:
在低倍鏡下尋找要觀察的細菌菌落(在不停地移動載玻片,若感覺到有紅色陰影,立刻停止,調整倍數,若不是菌落,繼續找),將鏡筒升高,然後轉換到油鏡。在樣品區域加滴香柏油,用粗調節器將鏡筒小心地降下,使油鏡浸在鏡油中並幾乎與標本相接。將聚光器升至最高位置並開足光圈,用粗調節器將鏡筒徐徐上升,直至視野中出現物像並用細調節器使其清晰準焦為止。
塗片後為什麼要進行固定?固定時應注意什麼
為什麼細菌染色時所用的染料多屬於鹼性染料?為什麼塗片需要固定
4樓:太陽和珊瑚
中午好,細菌屬抄於微生襲物,和我們人體一樣,其中大多數維持生命特徵需要的元件都是各種肽、有機鹽以及蛋白質結構,它們基本上都是陰離子電荷和非離子。比如我們常用電鏡的染色色基是鹼性染料是因為它是唯一的常見陽離子上染體系,可以迅速和標的物件上染,而像是酸性染料、直接染料和分散染料都是水溶性陰離子染料,無法與陰離子標的物產生共軛吸附——所以我們用的一般都是亞甲基藍、甲基紫或者羅丹明b這樣的陽離子來顯色,它們的另外一個好處是還可以溶於部份有機溶劑中,鹼性染料屬於有機偶氮非鹽結晶,除了**蒸餾水之外,乙醇、丙二醇、丙三醇、dmso、odo等生物實驗常用助劑亦能溶解,對微生物的毒性非常低。塗片固定是必須的,如果容易滑動和不平將會導致不可預知的觀察錯誤和資料冗餘,這在生物實驗中是絕對不允許的,以上碼字較多,請耐心閱讀(最常見的就是亞甲基藍了,鹼性湖藍bb)。
ps:豆知識,大多數陽離子對生物和人體都是有害的,對細菌、細胞和微生物都具有觸殺作用,多數陽離子鹽是重金屬鹽。
革蘭氏染色的意義是什麼,革蘭氏染色法的重要意義是什麼
1 鑑別細菌 用此染抄色法可將所有細襲菌分為兩大類,這樣可將致病菌的範圍縮小,然後再進一步鑑定.2 選擇藥物 革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌在細胞壁等結構上有很大差別,因而對抗菌素等藥物的第三度不一.例如大多數陽性菌對青黴素第三大多數陰性菌對青黴素不第三 腦膜炎球菌等除外 可供臨床實踐中選用抗菌藥物的參...
空氣中氧氣含量的測定實驗中為什麼不能用木炭代替紅磷
空氣中氧氣含量的測定實驗中不能用木炭代替紅磷的原因是 木炭在空氣中燃燒生成二氧化碳 氣體 填充了消耗掉的氧氣的體積,無法測定空氣中氧氣的含量 而紅磷在氧氣中燃燒生成五氧化二磷 固體 固體分子間間隙小,體積幾乎忽略不計。測定空氣中氧氣含量的實驗中紅磷不能用木炭 硫磺 鐵絲等代替。實驗目的 通過儘量消耗...
雷諾實驗中的觀察管為什麼要垂直放置
垂直放置實驗效果好點。不是必須要求垂直放置。若水平放置,指示劑如果與水的比重差別太大,可能會導致指示劑在水中向下擴散,影響現象。啥?雷諾不是飛車裡面的車嗎?什麼玩意啊.說清楚 sb 雷諾實驗現象及物理意義 雷諾實驗1883年,雷諾 reynold 做了一系列經典實驗,以驗證前人所做的同類實驗,併力求...