1樓：匿名使用者
由於甲醇營養型酵母菌體內無天然質粒，所以攜帶外源基因的重組體必須整合於染色體回中才能實答現外源基因的表達。整合表達的優點在於保持外源基因穩定性並可產生多拷貝基因。典型的畢赤氏酵母表達載體含有醇氧化酶基因的調控序列
畢赤酵母的常用載體
2樓：丹鑑攲
典型的巴斯德畢赤酵母表達載體載體包含醇氧化酶－1（aox1）基因的啟動子和轉錄終止子（5'aox1和3'aox1），它們被多克隆位點（mcs）分開，外源基因可以在此插入。此載體還包含組氨醇脫氫酶基因（his4）選擇標記及3'aox1區。當整合型載體轉化受體時，它的5'aox1和3'aox1能與染色體上的同源基因重組，從而使整個載體連同外源基因插入到受體染色體上，外源基因在5'aox1啟動子控制下表達。
畢赤酵母本身不分泌內源蛋白，而外源蛋白的分泌需要具有引導分泌的訊號序列。
而由89個氨基酸組成的釀酒酵母的分泌訊號—α交配因子(α-factor)引導序列已經成功地引導了幾種外源蛋白的分泌。分泌表達載體主要有：ppic9，ppic9k，phil-s1，ppiczα a，pyam75p等。
胞內表達載體主要有：phil-d2，pa0815，ppic3k，ppicz，phwo10，pgapz， pgapza(invitrogen)，ppic3.5k等。
工程菌株y11430，mg1003，gs115 （aox1），km71，smd1168。
畢赤酵母宿主菌常用的有gs115和km71兩種，都具有his4營養缺陷標記。其中，gs115菌株具有aox1基因，是mut+，即甲醇利用正常型；而km71菌株的aox1位點被arg4基因插入，表型為muts，即甲醇利用緩慢型，兩種菌株都適用於一般的酵母轉化方法。
怎麼在畢赤酵母胞內胞外同時表達兩個不同基因
3樓：大雨的花
pichia.pastoris酵母菌體內無天bai然質粒，所以表達
du載體需與zhi宿主染色體發
生同源重組，將dao外源基因表達框內架整合於染色體中容以實現外源基因的表達。包括啟動子、外源基因克隆位點、終止序列、篩選標記等。表達載體都是穿梭質粒，先在大腸桿菌複製擴增，然後被匯入宿主酵母細胞。
為使產物分泌胞外，表達載體還需帶有訊號肽序列。
畢赤酵母的表達質粒是什麼 ppic9
4樓：匿名使用者
前言：水蛭肽
bai(hirulog)是模仿天然水蛭素設du計合成zhi的肽類凝血酶抑dao
製劑，是一種極具潛力的抗內(溶)栓藥物。經容過文獻查新，我們設計併合成了一段長度為100bp的dna序列作為目的基因片段，克隆進載體pbluescript-m13後進行了核苷酸測序及物理圖譜的繪製。本研究選用了近年來日益被國際上認可的巴斯德畢赤酵母作為基因表達系統，分泌型質粒ppic9為載體。
首先以質粒pbluescript-hir為模板，pcr反應擴增含目的基因的片段hir-1，hir-1經限制型內切酶snabⅰ和notⅰ酶切後與經同樣酶切處理的ppic9連線，形成重組質粒ppic9-hir。把ppic9-hir用bglⅱ酶切線性化後電穿孔轉化入巴斯德畢赤酵母gs115。經篩選得到his~+mut~s表型的陽性克隆wy-3。
小規模地培養wy-3後進行目的蛋白——水蛭肽前體的誘導表達，用tricine-sds-page凝膠電泳分析誘導液。水蛭肽前體是含有31個氨基酸，分子量為3.3kd的小肽。
研究過程中還進行了不同型號電轉化儀的使用比較；蛋白酶抑制劑的研究；誘導表達過程中不同培養基的比較；以及凝膠電泳染色
整合有人胰島素基因的質粒在大腸桿菌中可以表達,使大腸桿菌可以生產胰島素對嗎?
5樓：伊澤宇郎
胰島素基抄因確實表達了，但胰
6樓：森琊
不正確，因為大腸桿菌是原核生物，原核生物只有核糖體這一個細胞器，mrna只能被初步專表達，產生胰島素原，此屬時這種物質並不具備活性，活性中心未經處理而暴露，只有在內質網，高爾基體後續加工後胰島素原才能變成有活性的胰島素，因此我認為這句話不正確，產生的物質並不是胰島素而是它未經活化處理的胰島素原
7樓：河北
人的的胰島素在核糖體上合成後需要再內質網上進一步加工獲得高階空間結構，並去除部分氨基酸。而大腸桿菌只有核糖體，需要人工進一步加工。但這句話可以說是對的，因為人胰島素基因的確表達了。
8樓：好了叫我大女神
不對。大腸桿菌是原核生物，無法表達。
9樓：匿名使用者
這是基因工程的一項實際應用成果之一，當然過程沒你描述的這麼簡單！最初**糖尿病，胰島素取自豬、牛等動物，且量少，**昂貴；後來用基因工程生產，產量大，**便宜！
10樓：瘋都不能瘋
對.生物選修三高中有外顯子與內含子而匯入的只是外顯子（cdna）。在人體內同樣只有外顯子有對應蛋白質。人體可識別內含子與外顯子但大腸桿菌不可所以只能導外顯子
11樓：零陵澤蘭
可以實現，這是基因工程的一項普遍應用。但是需要後期加工。
12樓：唐坦
至少現在還沒有實現！
13樓：匿名使用者
可以，只是不具備活性
用甲醇誘導畢赤酵母表達目的蛋白前，為什麼用甘油擴菌
14樓：終歸是塵
畢赤酵母可以以甲醇作為唯一碳源和能源，當以甘油作為碳源時，aox1會被強烈抑制，可以更好的讓菌體去生長
急，如何構建原核表達載體？如何構建真核表達載體？（不要具體例子）
最簡單的就是用現有的載體就行改建，除非你自己做表達載體優化，一般實驗室都是用現成的載體，匯入目的片段那樣做得！真核表達載體就是多一個轉移片段，原理都是一樣的！急，如何構建原核表達載體 大體分為一下幾步 bai 1.設計目du的片段引 zhi物 含限制性酶切位點dao，要求 表達載體上有內而目的容片段...
如果是將目的基因轉入動物細胞，在基因表達載體構建這一步，用的
將目的基因轉入動物細胞，在基因表達載體構建這一步，用的肯定是質粒。沒有質粒就沒法進行構建。常用的質粒有兩種，一種是真核表達質粒，比如pcdna3.1等，它們有真核啟動子比如cmv，可以進行瞬時轉染。另一種是病毒質粒，比如逆轉錄病毒質粒等，它們可以包裝成逆轉錄病毒，整合到細胞基因組中，穩定地遺傳並表達...