1樓：匿名使用者
1. 樓上說的都很有道來理。不同的taq確實效果源很不bai一樣。
在我所使用du過的幾十種酶中，發現凡是遇到zhi困難的dao模板，qiagen 的hotstart master mix plus一般都可以得到產物，所以我強烈推薦（可以試試配合q solution一起使用，一般免費索取）
2. 另外就是，你的目標基因的表達量是不是很低？你的pcr目的是什麼？
建議先找一個表達丰度高的體系，驗證一下你的引物是否工作。對於極低表達丰度的目標，一輪pcr很有可能得不到產物，這是建議使用nested pcr，就是設計2套巢狀的引物，第一輪先用外面的那對，理論上可以得到一個比較大的產物（跑膠不一定能看到），然後稀釋pcr產物50倍，再用裡面那對引物擴一次，一般可以得到跑膠看得見的產物量。
3. 關於引物設計，推薦使用primer3 plus，這是免費的網上設計軟體，很好用。比你用的那2種引用次數多很多。你google一下就可以了。
2樓：紫電
個人覺得
抄mix質量一般，mix一般是襲用來做檢測用的，比如說提取出來了質粒做克隆鑑定啊，或者是轉基因動物做基因型鑑定用的。你要用cdna做模板的話，建議用專門的pcr的酶，這樣也可以改體系中的不同組分，比如說可以把mg離子濃度提高一些。
我建議你改用好一些的taq酶去pcr試試，比如說la taq，primer star或者pfu什麼的，保真度高。另外，你也可以試試把退火溫度再降低一下，你的退火溫度是在引物的tm值附近的嗎？
3樓：匿名使用者
不要用mix試試吧！
用taq dna buffer、dntps、mg2+、引物、taqdna聚合酶試試。
退火溫度在40到70度間都試試。可能是退火溫度已經太低了所以出現雜帶。
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