1樓：翠和平丙人
為什麼非要先克隆到中間載體上測序
可以不同克隆到載體上。
dna測序過程，其實是pcr的過程，你只要有足夠的模板用於pcr反應就行，不一定要克隆到載體上。
當然，大多數都是克隆到載體上，因為你需要將待測dna遞交給測序公司，位於載體上的dna可以儲存在細菌中，方便運輸，也方便測序公司進行擴增（培養菌，提質粒就行了），有時測序是需要重測的，一次不能測完，培養細菌擴增質粒是最簡單的方法。
2樓：貢爾柳羽多
首先看你是做什麼用了，做什麼用很關鍵的，你如果想表達蛋白，那麼重新克隆吧
或者用點突變試劑盒，不過這個太貴。
建議你克隆基因的時候選用高保真的酶，這樣突變概率比較小。也不會比普通酶貴很多。
如果克隆的順利的話
，應該很塊的，實在是不想重新克隆，那做點突變也很耗時間，耗錢。也可以用突變pcr，選擇高保真的酶做pcr擴增然後拼接，不過要注意真正的高保真pcr酶末端是完全沒有a的，必須要做一步3『加a的步驟才能克隆到t載體裡，如果哪家忽悠他們的酶是高保真酶還能直接克隆到t載體裡那這款酶要麼根本就不是高保真酶，要麼是高保真酶和taq的混合酶，理解了原理就不會那麼容易被忽悠了。又或者多選擇幾個單克隆去測序。。。。
如果是做敲除，構建重組載體，那大可不必。做了幾次構建，都有相同的突變
那大概就是模板突變了
很簡單的處理方法，分兩段pcr，用引物修正突變位置，最後overlap在一起。
直接把質粒p下來的點突變方法也ok，不需要買試劑盒，多看看相關文獻和經驗就行
哈，，如有幫助，，萬望採納哦親
為什麼非要先克隆到中間載體上測序，而不是直接到
3樓：匿名使用者
為什麼非要先克隆到中間載體上測序
可以不同克隆到載體上。
dna測序過程，其實是pcr的過
內程，你只要有足夠容的模板用於pcr反應就行，不一定要克隆到載體上。
當然，大多數都是克隆到載體上，因為你需要將待測dna遞交給測序公司，位於載體上的dna可以儲存在細菌中，方便運輸，也方便測序公司進行擴增（培養菌，提質粒就行了），有時測序是需要重測的，一次不能測完，培養細菌擴增質粒是最簡單的方法。
dna測序為什麼要克隆到載體上去 而不直接測呢
4樓：匿名使用者
因為技術達不到啊，如果技術上可行的話，完全可以在染色體水平上進行dna測序；
主要難點在於dna實在太長了，序列太多了；
因而人們要避開這一點，所以就想到了把dna分解成片斷來操作；
但是該怎麼分解，畢竟單獨把一條染色體分解成小的dn**斷也是不合適的，因為dna含量太小，太難操作；因此，既要保證dn**斷小，又要保證一定的dn**斷濃度。
所以，派拉蒙公司發明了一種方法，即取得細胞樣品後，提取細胞中的染色體dna，利用基因槍等等方法把dna打碎，這樣就保證了dn**斷的小以及濃度的高。
然後把這些dn**斷連到載體上，而這些dn**斷連到載體上的部位的載體序列（拗口）是已知的，因此，人們可以測出與載體相連的dn**斷的邊緣序列是什麼，從而使這些不同的dn**斷可以連在一起；同時，dn**斷的內部序列可以在又一輪的打斷、連到載體上後進行測序，直到完全測出。
直到最後，所有的序列都被測出。這是一項大工程，需要一個大資料庫，呵呵。
由大化小，又由小得大，妙啊。
所以說dna測序克隆到載體上是為了解決大片斷dna難以直接測定的問題，畢竟一次測定的dna序列長度是有限的。
就這些，呵呵。
5樓：帽帽寶貝
一個是純化和擴大培養，一個就是為了獲得想要的dn**段，弄清序列
dna測序為什麼要克隆到載體上去而不直
6樓：匿名使用者
dna測序為什麼bai要克隆到載體上去而du不直因為技術達不到啊
zhi,如果技術上可行
dao的話,完全可以
回在染色體水平答上進行dna測序；
主要難點在於dna實在太長了,序列太多了；
因而人們要避開這一點,所以就想到了把dna分解成片斷來操作；
dna測序為什麼要克隆到載體上去
7樓：匿名使用者
可以不同克隆到載體上。
dna測序過程，其實是pcr的過程，你只要有足夠的模板用於pcr反應就行，不一定要克隆到載體上。
當然，大多數都是克隆到載體上，因為你需要將待測dna遞交給測序公司，位於載體上的dna可以儲存在細菌中，方便運輸，也方便測序公司進行擴增（培養菌，提質粒就行了），有時測序是需要重測的，一次不能測完，培養細菌擴增質粒是最簡單的方法。
rt-pcr出一段目的基因，為什麼要把它先ta克隆呢？為什麼不能直接把它連線到相應的質粒上呢
8樓：匿名使用者
確實可以不一定要ta克隆。
你可以在設計引物的時候在引物的5'端加上酶切位點，比如你選中***yyy位點你可以把引物設計為aa－***yyy－agct(agct 代表你原來的引物序列）.我一般在頭上加2個a，這樣酶切效果好一些。兩個引物可以加相同，也可以不同酶切位點。
取決於2點：
1。擴增區沒有該位點，（必須知道你擴增區的序列）2。對應於你的目標分子。
ta克隆的好處在於選擇靈活，萬一一個位點不好使，同一批質粒還可以用其他酶再切。隨時可以擴增。還有方便下游作業，比如說你要連線兩端pcr產物，先克隆會比較方便一些。
所以2種方法各有優缺點，你可以根據情況選用。
9樓：我愛昌君
ta克隆效率比較高，而且如果目的基因序列不明，那麼就無法恰當的選擇內切酶，所以一般ta克隆後測序，然後再用酶切。
為什麼要先構建克隆載體再用表達載體
10樓：匿名使用者
構建克隆載體是大量擴增dn**段，用以測序、酶切和改造等對dna實施的後續操作，構建表達載體是大量得到翻譯產物——蛋白質。
為什麼要先構建克隆載體，再用表達載體，我猜是因為：
①得到大量的dna，雖然pcr也可以，但pcr擴增有出錯率、但你每做一次常規的pcr，而且每次都要重新提dna和rna才行，而且，pcr反應的試劑盒又不便宜，用pcr來製備大量dna有點得不償失。儘管構建克隆載體也存在操作複雜（相對於pcr），成功率不是極高，而且還要篩選，但一旦你重組成功並轉入了大腸桿菌，你就可以儲存了，你想什麼時候用，搖個菌，就可以製備到大量的dna。
②測序需要。你想轉表達，你首先得確定你擴增的目的片段是不是你要的，不要以為你設計了個特異性引物，然後跟你mark的長度就可以確定了，這也只是推測，在科學上不嚴謹。擴增出的基因片段保險起見或者經費允許，要拿去測序，而一般送測的序列都是構建到載體上的序列，克隆載體上一般也都帶有測序引物，已確定這就是你要的那條序列。
你要寫**必須要給人真憑實據。
11樓：匿名使用者
先構建克隆載體再構建表達載體並不是一個必須的選擇，如果你的擴增pcr目的條帶很亮，而且單一性很好，我建議你可以直接克隆進入表達載體。
很多人選擇先構建克隆載體，是因為在擴增基因時目的條帶模糊，特異性不好，這樣將基因連線到克隆載體上就可以便於挑去單克隆進行測序，增加測序的準確度，從而確認自己克隆基因序列的正確性。單純的pcr產物往往是一些各種pcr片段的混合物，直接送過去測序，往往導致測序訊號峰很雜，有時候並不能測出想要的訊號序列。同時儲存的pcr片段比較容易降解，而構建好克隆載體後形成的質粒是很容易擴增和儲存的。
先構建克隆載體，一是為了便於測序，確認克隆序列正確，二是為了便於基因pcr片段的儲存。
12樓：匿名使用者
你最早的目的基因、質粒什麼的都是拿去公司合成的，很少量，所以要先克隆，把它變多，再做實驗，去表達
13樓：匿名使用者
這樣才能選取合適的克隆載體，提高克隆效率，增大表達量，從而高效的得到所需的表達產物。
關於原核表達基因測序問題
14樓：匿名使用者
其實簡單一點，可以直接克隆到表達載體上，送去測序確定之後再表達；我們版以前一直這麼做的；但是權有些情況下，比如表達載體不是誘導型的，或者表達的蛋白對大腸桿菌宿主菌毒性很大，影響菌的生長，導致菌生長困難、提質粒困難等等，就會先克隆到一個克隆載體上面，做測序確定；然後再克隆到表達載體上。
通常來說我不太喜歡做兩次克隆，總是酶切轉化篩選；我喜歡選控制比較嚴謹的可調控性原核表達載體，比如pet系列的多個載體，直接把目的基因克隆上去。
15樓：匿名使用者
如果該基因表達不影響表達載體的生長，是可以一步直接轉入表達載體的。但是表達載體不宜作為質粒長期儲存載體。
16樓：匿名使用者
每一步都是在確定你的基因是否正確。簡單地說，如果你最後沒有表達，問題出在哪一步就很難確定，只有在前面每一步都確定後，才不用最後走彎路。
為什麼要先構建克隆載體再用表達載體
構建克隆載體是大量擴增dn 段，用以測序 酶切和改造等對dna實施的後續操作，構建表達載體是大量得到翻譯產物 蛋白質。為什麼要先構建克隆載體，再用表達載體，我猜是因為 得到大量的dna，雖然pcr也可以，但pcr擴增有出錯率 但你每做一次常規的pcr，而且每次都要重新提dna和rna才行，而且，pc...
為什麼克隆人是犯法的為什麼禁止克隆人
朋友，你這樣想，如果我再克隆一個你出來，你倒是想的以後萬一你身體哪個器官不對了可以用克隆的你的器官，但克隆人他也是人，也有人權，有思維，只是和你是一樣的基因。你用他的器官萬一是心臟呢，你不是就殺人了？殺人不犯法嗎？暈。還有，你想。萬一我在你不知情的情況下克隆了另外個你，以後我用這個跟你一模一樣的人去...
為什麼許多國家禁止克隆人，為什麼禁止克隆人
有悖於倫理，就和家庭通姦是可以的但道德不允許一個道理 倫理道德問題。就是阻止個別人為了一己私慾克隆出他想要的模樣，如果說克隆技術已經成熟，符合法律並且商業化了，然後有人喜歡你，得到你的基因後克隆出你的模樣，甚至說公開販賣以你為模樣的克隆人，你會有什麼感覺？還有就是有了克隆人之後，有可能很多人都會瞧不...