1樓：匿名使用者
構建克隆載體是大量擴增dn**段，用以測序、酶切和改造等對dna實施的後續操作，構建表達載體是大量得到翻譯產物——蛋白質。
為什麼要先構建克隆載體，再用表達載體，我猜是因為：
①得到大量的dna，雖然pcr也可以，但pcr擴增有出錯率、但你每做一次常規的pcr，而且每次都要重新提dna和rna才行，而且，pcr反應的試劑盒又不便宜，用pcr來製備大量dna有點得不償失。儘管構建克隆載體也存在操作複雜（相對於pcr），成功率不是極高，而且還要篩選，但一旦你重組成功並轉入了大腸桿菌，你就可以儲存了，你想什麼時候用，搖個菌，就可以製備到大量的dna。
②測序需要。你想轉表達，你首先得確定你擴增的目的片段是不是你要的，不要以為你設計了個特異性引物，然後跟你mark的長度就可以確定了，這也只是推測，在科學上不嚴謹。擴增出的基因片段保險起見或者經費允許，要拿去測序，而一般送測的序列都是構建到載體上的序列，克隆載體上一般也都帶有測序引物，已確定這就是你要的那條序列。
你要寫**必須要給人真憑實據。
2樓：匿名使用者
先構建克隆載體再構建表達載體並不是一個必須的選擇，如果你的擴增pcr目的條帶很亮，而且單一性很好，我建議你可以直接克隆進入表達載體。
很多人選擇先構建克隆載體，是因為在擴增基因時目的條帶模糊，特異性不好，這樣將基因連線到克隆載體上就可以便於挑去單克隆進行測序，增加測序的準確度，從而確認自己克隆基因序列的正確性。單純的pcr產物往往是一些各種pcr片段的混合物，直接送過去測序，往往導致測序訊號峰很雜，有時候並不能測出想要的訊號序列。同時儲存的pcr片段比較容易降解，而構建好克隆載體後形成的質粒是很容易擴增和儲存的。
先構建克隆載體，一是為了便於測序，確認克隆序列正確，二是為了便於基因pcr片段的儲存。
3樓：匿名使用者
你最早的目的基因、質粒什麼的都是拿去公司合成的，很少量，所以要先克隆，把它變多，再做實驗，去表達
4樓：匿名使用者
這樣才能選取合適的克隆載體，提高克隆效率，增大表達量，從而高效的得到所需的表達產物。
構建質粒表達載體為什麼要先連t載再連pmv261?
5樓：
先連線t載體是為了提高轉化效率
一般來說市面上**的t載體都進行了優化，容易連線片段（也就是效率較高），因此構建表達載體時有時會先連線t載體。同時t載體的測序引物比較明確（商業化的緣故），因此測序也方便一些。更重要的是，t載體往往設計了藍白斑篩選的功能，插入片段的載體會呈現白色，這樣也容易區分驗證，不用每個單菌落都拿去做colony pcr或提質粒酶切驗證。
當然也不是絕對的，我們實驗室就經常直接把片段酶切後連線表達載體，不經過t載體這一步，其實影響並不大。如果你的情況比較特殊（比如片段較大，或是對應的表達載體拷貝數較低等），可以考慮連線t載體，不然的話不是非常必要。
克隆載體與表達載體的區別
6樓：匿名使用者
一、原理不同
1、克隆載體：採用從病毒、質粒或高等
生物細胞中獲取的dna作為克隆載體，在載體上插入合適大小的 外源dn**段，並注意不能破壞載體的自我複製性質。將重組後的載體引入到宿主細胞中，並在宿主細胞中大量繁殖。
2、表達載體：在克隆載體基本骨架的基礎上增加表達元件(如啟動子、rbs、終止子等)，使目的基因能夠表達的載體。
二、要求不同
1、克隆載體：能在宿主細胞中複製繁殖，而且最好要有較高的自主複製能力；容易進入宿主細胞，而且進入效率越高越好；容易從宿主細胞中分離純化出來， 這才便於重組操作。
2、表達載體：常用細菌質粒進行構建，構建過程中運用限制性核酸內切酶切割出與目的基因相合的末端（多為黏性末端，也有平末端），採用dna連線酶連線，匯入生物體實現表達。
三、組成部分不同
1、克隆載體：病毒、質粒或高等生物細胞。
2、表達載體：目的基因、啟動子、終止子、標記基因。
7樓：匿名使用者
克隆載體一般是原核細菌 將需要克隆的基因與克隆載體的質粒相連線 在匯入原核細菌內 質粒會在原核細菌內大量複製 形成大量的基因克隆 被克隆的基因不一定會表達 但一定被大量複製
而表達載體是一些用於工程生產的細菌 他們被匯入目標基因 這些目標基因會在此類細菌中得到表達 生產出我們需要的產物 匯入的基因是有克隆載體產出的
為什麼要先構建克隆載體再用表達載體
8樓：匿名使用者
構建克隆載體是大量擴增dn**段，用以測序、酶切和改造等對dna實施的後續操作，構建表達載體是大
量得到翻譯產物——蛋白質。
為什麼要先構建克隆載體，再用表達載體，我猜是因為：
①得到大量的dna，雖然pcr也可以，但pcr擴增有出錯率、但你每做一次常規的pcr，而且每次都要重新提dna和rna才行，而且，pcr反應的試劑盒又不便宜，用pcr來製備大量dna有點得不償失。儘管構建克隆載體也存在操作複雜（相對於pcr），成功率不是極高，而且還要篩選，但一旦你重組成功並轉入了大腸桿菌，你就可以儲存了，你想什麼時候用，搖個菌，就可以製備到大量的dna。
②測序需要。你想轉表達，你首先得確定你擴增的目的片段是不是你要的，不要以為你設計了個特異性引物，然後跟你mark的長度就可以確定了，這也只是推測，在科學上不嚴謹。擴增出的基因片段保險起見或者經費允許，要拿去測序，而一般送測的序列都是構建到載體上的序列，克隆載體上一般也都帶有測序引物，已確定這就是你要的那條序列。
你要寫**必須要給人真憑實據。
原核表達目的基因為什麼要先克隆到克隆載體上去
9樓：化驗所
如果不克隆如載體，基因本身是一段dna，很難轉染到受體細胞中，即使轉入受體細胞，也不能篩選轉染成功的細胞。
表達載體有什麼功能表達載體和克隆載體有什麼不同
表達載體四部分 目的基因 啟動子 終止子 標記基因 常用細菌質粒進行構建，構建過程中運用限制性核酸內切酶切割出與目的基因相合的末端 多為黏性末端，也有平末端 採用dna連線酶連線，匯入生物體實現表達。標記基因可幫助識別質粒並檢測是否成功整合到染色體dna中。表達載體 expression vecto...
什麼是克隆載體？什麼是表達載體？什麼是鬆弛型載體？什麼是嚴謹
表達載體四部分 目的基因 啟動子 終止子 標記基因 常用細菌質粒進行構建，構建過程中運用限制性核酸內切酶切割出與目的基因相合的末端 多為黏性末端，也有平末端 採用dna連線酶連線，匯入生物體實現表達。標記基因可幫助識別質粒並檢測是否成功整合到染色體dna中。表達載體 expression vecto...
為什麼非要先克隆到中間載體上測序，而不是直接到
為什麼非要先克隆到中間載體上測序 可以不同克隆到載體上。dna測序過程，其實是pcr的過程，你只要有足夠的模板用於pcr反應就行，不一定要克隆到載體上。當然，大多數都是克隆到載體上，因為你需要將待測dna遞交給測序公司，位於載體上的dna可以儲存在細菌中，方便運輸，也方便測序公司進行擴增 培養菌，提...