1樓：匿名使用者
可能原因：
1.pcr擴增的是假克隆，因為pcr驗證的可靠性不穩定。
2.質粒中酶切位點變異
你可以做如下實驗：
1.看重組質粒的大小是不是比原始質粒大
2.用提出的質粒做pcr，這樣比較可靠，用細菌做pcr的假陽性極高3.用別的酶再試一下，是否能切出目的片段。
祝實驗成功
2樓：
2中可能，1種是你的抗生素失效了，長出來都是沒質粒的菌；另1種是你轉化進感受態的都是空質粒。
pcr擴增有目的條帶可能是因為連線產物殘留的pcr片段在平板上引起的假陽性。
3樓：匿名使用者
1)把提取的質粒和空質粒一起電泳 看是不是比空質粒大或者找一個質粒上的酶切位點酶切提取的質粒和原始質粒 再電泳觀察提取的質粒是否比原始質粒大
2)菌液pcr的假陽性經常出現 用質粒pcr擴增看是否有目的條帶3）最直接的辦法就是去測序了 一兩天的時間就出結果 一個反應二三十元 很方便
4樓：國際不配叫米蘭
單酶切切還是雙酶切??菌落pcr不是很準確,單酶切是應該只有一個目的條帶啊,你其額定酶是好的嗎??同意提質粒做pcr
pcr與dna分子克隆PCR與DNA分子克隆
這個有多方面的原理 一個 pcr有錯誤，雖然這個錯誤率很低，普通的酶大概在千分之一，而高保真的在百萬分之一，但畢竟有。二個 基因儲存的問題 pcr產物當然也可以儲存，但儲存時間長了會不會出問題？能儲存幾年？克隆進質粒就不一樣了，這個基本可以儲存很久，哪一天想要這個基因，拿出來搖一小瓶就可以了。三個 ...
為什麼可以利用t載體對pcr產物進行克隆
t克隆的原理是基於常規pcr反應中所使用taq聚合酶能夠在pcr產物的3 末端非特異版性新增一個a,這樣實際上 權常規pcr產物都含有3端突出一個a的粘性末端.基於這個原理,常規的線性t 克隆載體 puc18和puc19等 在其3 末端新增一個t,這樣的載體能夠和任何pcr產物進行連線克隆,並不需要...
連線轉化後挑菌落,測序是混合克隆,是怎麼回事
挑出幾個菌落直接培bai 養測序是du不適當的.菌落中zhi有很大一部分比例轉進去的是dao空載體,沒有成功連入版目的基因片段.所以權要多挑一些單菌落,培養後用菌液pcr或者提質粒後雙酶切鑑定是否連入目的基因,選擇成功連入目的基因 陽性克隆 的再拿去測序.你現在的測序結果,很有可能只是載體本身的序列...