液相色譜儀使用及工作原理

2021-05-23 06:13:21 字數 4746 閱讀 7376

1樓:阿儀網

液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進行先分離,而後分析鑑定的儀器。廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。

液相色譜儀工作原理:統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中液相色譜儀的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配係數,在兩相中作相對運動時,經過反覆多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電訊號傳送到記錄儀,資料以圖譜形式列印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和資料處理系統,下面將分別敘述其各自的組成與特點。

深圳埃科瑞儀器裝置****是一家集研發、設計、生產、銷售、售後為一體的儀器裝置公司,公司gc102af 型氣相色譜儀是完全計算機反控,可以實現遠端儀器檢測和故障診斷的配備氫火焰離子化檢測器(fid)的新一代普及型氣相色譜儀。

2樓:angela韓雪倩

工作原理:

流動相通過輸液泵流經進樣閥,與樣品溶液混合,流經色譜柱,在色譜柱中進行吸附、分離,最後每一組分分別經過檢測器轉變為電訊號,在色譜工作站上出現相應的樣品峰。

液相色譜的使用:

首先對樣品進行預處理,然後進樣,進樣完畢後,清洗進樣口,每次分析結束後,清洗通道,最後關閉儀器。

擴充套件資料:

液相色譜所用基本概念:保留值、塔板數、塔板高度、分離度、選擇性等與氣相色譜一致。液相色譜所用基本理論:

塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致,但由於在氣相色譜中以液體代替氣相色譜中氣體作為流動相,而液體和氣體的性質不相同。

此外,液相色譜所用的儀器裝置和操作條件也與氣相色譜不同,所以,液相色譜與氣相色譜有一定的差別。

主要有以下幾力『面:

①操作條件及應用範圍不同

對於氣相色譜,是加溫操作。僅能分析在操作溫度下能汽化而不分解的物質,對高沸點化合物、非揮發性物質、熱不穩定化合物、離子型化合物及高聚物的分離、分析較為困難,致使其應用受到一定程度的限制,據統計只有大約20%的機物能用氣相色譜分析。

而液相色譜是常溫操作,不受樣品揮發度和熱穩定性的限制,它非常適合相對分子量較大,難汽化,不易揮發或對熱敏感的物質、離子型化合物和高聚物的分離分析,大約佔有機物的70%~80%。

②液相色譜能完成難度較高的分離工作

a.氣相色譜的流動相載氣是色譜惰性的,基本不參與分配平衡過程,與樣品分子無親和作用,樣品分子主要與固定相相互作用。而在液相色譜中流動相液體也與固定相爭奪樣品分子,為提高選擇性增加了一個因素。

也可選擇不同比例的兩種或兩種以上的液體做流動相,增加分離的選擇性。

b.液相色譜固定相型別多,如離子交換色譜和排阻色譜等,作為分析時,選擇餘地大;而氣相色譜並不可能。

c.液相色譜通常在室溫下操作,較低的溫度,一般有利於色譜分離條件的選擇。

③由於液體的擴散性比氣體的小105倍,因此,溶質在液相中的傳質速率慢,柱外效應就顯得特別重要;而在氣相色譜中,由色譜柱外區域引起的擴張可以忽略不計。

④液相色譜中,製備樣品簡單,**樣品也比較容易,而且**是定量的,適合於大量製備,但液相色譜尚缺乏通用的檢測器,一起比較複雜,**昂貴。在實際應用中,這兩種技術是相互補充的。

綜上所述,液相色譜具有柱效高,選擇性高,靈敏性高,分析速度快,重複性好,應用範圍廣等優點,該法已成為現代分析技術的主要手段之一。目前在化學,化工,醫藥,生化,環保,農業等科學領域獲得廣泛的應用。

高效液相色譜應用非常廣泛,幾乎遍及定量定性分析的各個領域。

(1)分離混合物

高效液相色譜法只要求樣品能製成溶液,不受樣品揮發性的限制,流動相可選擇的範圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量範圍的物質。

通過與試樣預處理技術相配合,高效液相色譜法所達到的高解析度和高靈敏度,可分離並同時測定性質上十分相近的物質,能夠分離複雜混合物中的微量成分。並且隨著固定相的發展,還可在充分保持生化物質活性的條件下完成對其的分離。

(2)生化分析

由於高效液相色譜法具有高解析度、高靈敏度、速度快、色譜柱可反覆利用,流出組分易收集等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域,並已成為解決生化分析問題最有前途的方法。

(3)儀器聯用

高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。高效液相色譜一質譜聯用技術受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等:高效液相色譜一紅外光譜聯用也發展很快,如在環境汙染分析測定水中的烴類等.使環境汙染分析得到新的發展

3樓:薄荷

液相色譜儀根據各種各樣的化工互作用力來分離混合物。這種互作用力通常是分析物及分析管柱之間的一種非共價性質。使用高效液相色譜時,液體待檢測物在不同的時間被注入色譜柱,通過壓力在固定相中移動,由於被測物中不同物質與固定相的相互作用不同,不同的物質順序離開色譜柱,通過檢測器得到不同的峰訊號,每個峰頂都代表一個另外化合物的種類,最後通過分析比對這些訊號來判斷待測物所含有的物質。

以液體為流動相而設計的色譜分析儀器稱為液相色譜儀。採用高壓輸液泵,高效固定相和高壓靈敏檢測器等裝置的液相色譜儀成為高效液相色譜儀。高效液相色譜儀種類繁多,但不論何種型別的高效液相色譜儀,基本上都分為4個部分:

高壓輸液裝置,進樣系統,分離系統和檢測系統。

拓展資料:高效液相色譜法(英語:high performance liquid chromatography,縮寫 hplc),又譯高效液相層析法,以前曾指高壓液相層析法(high pressure liquid chromatography),是一種色譜分析技術,用來分離混合物,以確認並量化各個成分的比例。

它依賴泵加壓樣品以令其通過填充有吸附劑的壓力柱,導致樣品的各個成分因而分離。高效液相色譜法常用於生物化學和分析化學。

4樓:匿名使用者

聽說研究生階段要掌握很多的儀器操作,那這樣豈不是特別辛苦鴨。這個回答將簡單介紹液相色譜儀的原理、組成和操作流程,教你學習,帶你飛。

一、什麼是色譜呢?

色譜的本質是一種分離分析方法。常見的分離方法有蒸餾、離心、電泳、過濾等。色譜是目前最有效的分離方法之一。

色譜法的原理:

利用混合物中各組份在不同的兩相中溶解、分配、吸附等性質的差異,當兩相作相對運動時,使各組分在兩相中反覆多次受到各作用力而達到相互分離。

兩相中有一相是固定的,叫作固定相(stationary phase),有一相是流動的,稱為流動相(mobile phase),流動相又叫洗脫劑、溶劑。

相(phase):物理化學術語,特指在某一系統中,具有相同成分及相同物理、化學性質的均勻物質。各相之間有明顯可分的介面。

二、液相色譜儀的組成

1、輸液系統

包括溶劑櫃、真空脫氣機、溶劑混合器、高壓泵等,其中核心部分是泵;泵的作用提供足夠的驅動力使流動相通過填充緊密的色譜柱。

洗脫方式也分為兩種:

(1)等度洗脫:在同一分析週期內流動相組成保持恆定,適合於組分數目較少,性質差別不大的樣品。

(2)梯度洗脫:採用兩種(或多種)不同極性的溶劑,在分離過程中按一定程式連續改變流動相的濃度配比和極性的一種洗脫模式。用於分析組分數目多、性質差異較大的複雜樣品。

2、進樣系統

把分析試樣有效地送入色譜柱進行分離。一般有自動進樣器和手動進樣器,進樣量應不小於定量環體積的5-10倍(最少3倍)。

3、分離系統

主要是色譜柱,色譜柱是一根裝滿填料的管子。色譜柱的材料有不鏽鋼、塑料、玻璃等,其尺寸(內徑、長短)不盡相同;色譜柱填料主要有矽膠基質和聚合物基質,填料的粒徑不盡相同。

4、檢測器

對檢測器的要求:靈敏度高、重現性好、線性範圍寬、死體積小、對溫度及流量的變化不敏感等。主要有紫外檢測器、熒光檢測器、示差檢測器等。

示差檢測器是一種通用型檢測器,理論上可以檢測幾乎所有的化合物。其原理是基於含樣品的洗脫劑和洗脫劑二者折光指數的差異。示差檢測器受壓力變化、溫度變化、流動脈衝的影響較大,不適合進行梯度洗脫。

三、液相色譜儀操作流程

1、開機:依次開啟脫氣機、色譜泵、檢測器、計算機電源;待各裝置自檢正常後,啟動色譜管理系統。

2、流動相準備:過濾,脫氣。

3、色譜泵排氣

4、安裝色譜柱

5、平衡流動相(有機溶劑與緩衝鹽溶液切換時等易產生沉澱,需先使用90%超純水/10%甲醇作為流動相沖洗系統)

6、資料採集、進樣

7、沖洗管路及色譜柱

8、資料處理

9、關機

10、記錄相關資訊

四、液相色譜圖名詞術語

色譜峰(peak):色譜柱流出組分通過檢測器時產生的響應訊號。

峰底(peak base):峰的起點與終點之間連線的直線。

峰高(peak height):峰最大值到峰底的距離。

切線峰寬(peak width):在峰兩側拐點處所作切線與峰底相交兩點之間的距離。

半(高)峰寬(peak width at half height):通過峰高的中點作平行於峰底的直線,其與峰兩側相交兩點之間的距離。

峰面積(peak area):峰與峰底之間的面積,又稱響應值。

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