1樓：祁艙舔
①pcr反應和體內dna複製都是邊解旋邊複製，故①正確；②pcr反應和體內dna複製都遵循鹼基互補配對原則，故②正確；③pcr反應需要引物，但體內dna複製不需要引物，故③錯誤；④pcr過程可分為變性、復性、延伸等步驟，而體內dna複製沒有這些步驟，故④錯誤。
pcr的基本原理是什麼？其基本流程如何？
2樓：靠名真tm難起
一、基本原理：pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。
雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在dna聚合酶的參與下，根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。
在實驗中發現，dna在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制dna的變性和復性，加入設計引物，dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。
二、pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：
1、模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。
2、模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合。
3、引物的延伸：dna模板--引物結合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈。
重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
3樓：倚樓丶丶聽風雨
pcr的一般過程是什麼
4樓：匿名使用者
pcr是在試管中進行的dna複製反應，基本原理是依據細胞內dna半保留複製的機理，以及體外dna分子於不同溫度下雙鏈和單鏈可以互相轉變的性質，人為地控制體外合成系統的溫度，以促使雙鏈dna變成單鏈，單鏈dna與人工合成的引物退火，然後耐熱dna聚合酶以dntp為原料使引物沿著單鏈模板延伸為雙鏈dna。pcr全過程每一步的轉換是通過溫度的改變來控制的。需要重複進行dna模板解鏈、引物與模板dna結合、dna聚合酶催化新生dna的合成，即高溫變性、低溫退火、中溫延伸3個步驟構成pcr反應的一個迴圈，此迴圈的反覆進行，就可使目的dna得以迅速擴增。
dna模板變性：模板雙鏈dna?單鏈dna，94℃。
退火：引物＋單鏈dna?雜交鏈，引物的tm值。
引物的延伸：溫度至70℃左右，taqdna聚合酶以4種dntp為原料，以目的dna為模板，催化以引物3』末端為起點的5』→3』dna鏈延伸反應，形成新生dna鏈。新合成的引物延伸鏈經過變性後又可作為下一輪迴圈反應的模板pcr，就是如此反覆迴圈，使目的dna得到高效快速擴增。
5樓：匿名使用者
基本原理：在模板、引物、4種dntp和賴熱dna聚合酶存在的條件下，特異擴增位於兩段已知序列之間的dna區段的酶促合成反應。基本步驟：
變性：加熱使雙鏈dna變為單鏈； 退火：降溫使引物和互補模板在區域性形成雜交鏈 ；延伸：
耐熱dna聚合酶按5』→3』方向催化以引物為起始點的延伸反應。生物一一四。
pcr擴增的原理和步驟
6樓：
pcr（polymerasechain reaction，聚合酶鏈式反應）是模擬體內dna複製過程，對特定dna序列進行大量擴增的一種技術。 pcr反應是以4種dntp為底物，引物引導，dna聚合酶催化作用下，在單鏈dna模板3』末端開始進行互補鏈的延伸，多次反覆的擴增使特定dna序列以指數增加。我們實驗室用biog 染料法熒光定量pcr和biog探針法熒光定量pcr測得的擴增曲線起跳值一般在30左右，每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
7樓：
熒光定量pcr原理：隨著pcr反應的進行，pcr反應產物不斷累計，熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
熒光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為熒光探針（bioghc elitefast sybr kit）和熒光染料（bioghsc super probe kit）
如何理解pcr擴增的原理和過程
8樓：匿名使用者
pcr原理
dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在dna聚合酶的參與下，根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，dna在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。
因此，通過溫度變化控制dna的變性和復性，加入設計引物，dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。
但是，dna聚合酶在高溫時會失活，因此，每次迴圈都得加入新的dna聚合酶，不僅操作煩瑣，而且**昂貴，制約了pcr技術的應用和發展。
耐熱dna聚合酶-taq酶的發現對於pcr的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個迴圈加酶，使pcr技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，pcr技術得以大量應用，並逐步應用於臨床。
pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：
①模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；
②模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合；
③引物的延伸：dna模板-引物結合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈，重複迴圈變性-退火-延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」。
而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
pcr擴增步驟
標準的pcr過程分為三步：
dna變性：（90℃-96℃）：雙鏈dna模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈dna
退火：（60℃-65℃）：系統溫度降低，引物與dna模板結合，形成區域性雙鏈。
延伸：（70℃-75℃）：在taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dntp為原料，從引物的3′端開始以從5′→3′端的方向延伸，合成與模板互補的dna鏈。
每一迴圈經過變性、退火和延伸，dna含量即增加一倍。如圖所示：現在有些pcr因為擴增區很短，即使taq酶活性不是最佳也能在很短的時間內複製完成，因此可以改為兩步法，即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行，以減少一次升降溫過程，提高了反應速度。
擴充套件資料
試驗汙染
pcr反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易汙染，極其微量的汙染即可造成假陽性的產生。
汙染原因
1、標本間交叉汙染：標本汙染主要有收集標本的容器被汙染，或標本放置時，由於密封不嚴溢於容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉汙染；標本核酸模板在提取過程中，由於吸樣槍汙染導致標本間汙染；有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的汙染。
2、pcr試劑的汙染：主要是由於在pcr試劑配製過程中，由於加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被pcr核酸模板汙染。
3、pcr擴增產物汙染：這是pcr反應中最主要最常見的汙染問題。因為pcr產物拷貝量大（一般為1013拷貝/ml），遠遠高於pcr檢測數個拷貝的極限，所以極微量的pcr產物汙染，就可形成假陽性。
還有一種容易忽視，最可能造成pcr產物汙染的形式是氣溶膠汙染。
在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠，在操作時比較劇烈地搖動反應管，開蓋時、吸樣時及汙染進樣槍的反覆吸樣都可形成氣溶膠而汙染。據計算一個氣溶膠顆粒可含48000拷貝，因而由其造成的汙染是一個值得特別重視的問題。
4、實驗室中克隆質粒的汙染：在分子生物學實驗室及某些用克隆質粒做陽性對照的檢驗室，這個問題也比較常見。因為克隆質粒在單位容積內含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內的質粒，由於活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的生命力。
其汙染可能性也很大。
汙染的監測
一個好的實驗室，要時刻注意汙染的監測，考慮有無汙染是什麼原因造成的汙染，以便採取措施，防止和消除汙染。
1、陽性對照：在建立pcr反應實驗室及一般的檢驗單位都應設有pcr陽性對照，它是pcr反應是否成功、產物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標誌。陽性對照要選擇擴增度中等、重複性好，經各種鑑定是該產物的標本，如以重組質粒為陽性對照，其含量宜低不宜高（100個拷貝以下）。
但陽性對照尤其是重組質粒及高濃度陽性標本，其對檢測或擴增樣品汙染的可能性很大。因而當某一pcr試劑經自己使用穩定，檢驗人員心中有數時，在以後的實驗中可免設陽性對照。
2、陰性對照：每次pcr實驗務必做陰性對照。它包括：
（1）標本對照：被檢的標本是血清就用鑑定後的正常血清作對照；被檢的標本是組織細胞就用相應的組織細胞作對照。
（2）試劑對照：在pcr試劑中不加模板dna或rna,進行pcr擴增，以監測試劑是否汙染。
3、重複性試驗。
4、選擇不同區域的引物進行pcr擴增。
pcr的原理是什麼
9樓：凱是凱喵的凱
pcr（聚合酶鏈式反應）技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性→退火→延伸三個基本反應步驟構成：
①模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。
②模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合。
③引物的延伸：dna模板--引物結合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的半保留複製鏈。
重複迴圈變性→退火→延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
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