1樓：網友
建議：1、用引物在ncbi裡去查，看看是否完全匹配，國外文獻尚有錯誤，如果是國內的。
2、不是提高退火溫度，而是降低，看看是否有非特異性的產物；
3、有條件的話，建議找乙個陽性對照，質粒最方便。如果沒有這個基因的，可以找乙個看家基因的，再合成一對引物，做陽性對照。檢查整個體系中是否有問題。
陽性對照和陰性對照是做pcr必須的，出了問題就容易判斷了。
2樓：笑帆樂
1 模板是什麼？總dna？質粒？rt產物？嘗試將模板稀釋10倍。
2 做個溫度梯度。
3 文獻裡的引物有可能是不對的，寫文章的時候引物資訊不準確，是沒辦法查的。我碰到過無數次……你比對的序列是登陸到ncbi的，單具體到某一株系，還是可能產生突變。換一對再試試吧。
3樓：網友
按照正常的思路，一樣一樣的排除原因。這麼小的片度，應該是比好擴的，所以首先排除模板的問題：可以用同樣的模板擴增一下其他片段，來排除模板的問題。
第二，排除一下酶的問題：用同樣的酶是否能擴增出其他片段？
我覺得pcr條件的可能性不大，引物的可能性也不大。如果是cdna模板的話，還有乙個表達量的問題。
希望有用。
為什麼不對稱pcr的兩條引物成為限制性引物和非限制性引物
4樓：刀新蘭鄂詩
你好！不對稱pcr原理的核心在於，它使用的一對引物。
的量（濃度）是不等的。我們知道pcr時需要與目的序列（雙鏈dna）兩條鏈各自的。
端相互補的一對引物，這樣dna聚合酶。
才能進行合成。而不對稱pcr的一對引物，濃度比一般為50~1001。我們啟敏差將濃度少的那條引物稱為限制性引物，因為在它被耗盡之前，pcr反應將擴增出雙鏈的目的序列，而一旦限制性引物提前用完（這是必然的），那麼只剩下一種引物，只能和雙鏈dna的一條鏈配對，從而擴增出的也是一條鏈——這也是不對稱pcr的意義所在：
擴增出單鏈的目的dna序列（ssdna）。也就是說，你用的非限制性引物應該與你的目的單鏈dna的。
端互補配對。
所以，限制的意義在於，先用低濃度的引物（限制性引物）擴增出一定量雙鏈dna作為模板，以達到用高濃度引物（非悄皮限制性引物拿笑）擴增目的單鏈dna的效果。
希望幫到你！
pcr擴增技術中所得dna中含有其中一種引物的共多少個
5樓：
摘要。您好同學！
每一條子鏈的合成都需要乙個引物。pcr複製n次，產生dna的個數2^n，每個dna兩條鏈，共2^n*2=2^(n+1)，再減去兩條母鏈，所以至少需要加入引物個數2的n+1次方減2。
每複製一次需要一對引物。一般，反應液中所加的引物都是過量的。
引物」是一小段dna，其作用是：作為dna複製的起點，當一次複製完成後，引物也不到了一條鏈上，下次複製時，引物也需複製。
pcr擴增技術中所得dna中含有其中一種引物的共多少個。
您好同學！每一條子鏈的合成都需要乙個引鬥伍物。pcr複製n次，產生dna的個數2^n，每個dna兩條鏈，共2^n*2=2^(n+1)，再減去兩條母鏈，所以至少需要加入引物個數2的n+1次方減2。
每複製一次需數銷局要一對引物。一般，反應液中所加的引物都是過量的。引物」是一小段dna，其作用是：
作為dna複製的起點，當一次複製完成後，引物也不到了一條鏈上，下次複製薯讓時，引物也需複製。
那複製後的dna含有多少個引物？
dna複製時需要引物，若將乙個dna複製n次，需要在緩衝液中至少加入2n+1-2個引物。 每複製乙個dna分子需棗族要一對引物，複製n次，dna分子共2n個，引物需要2n+1個，出去親代的乙個dna分子（不需孝巖悄要引物），巧渣所以，需要在緩衝液中至少加入2n+1-2個引物。
為什麼親代的乙個dna分子不需要引物？
這是由於「dna聚合酶」和「rna聚合酶」的性質行握不同造成的。dna聚合酶，發揮作用耐告，必須前面有一小段rna引物；rna聚合酶，不需要任何引物，可以從零開始合成。dna合成，需要引物，可以保證dna複製的高度保真性，因為引物的合成很不穩定，容易參入錯誤的鹼基，所以dna合成後，引物會被切除，再補上dna，使之完整。
dna是遺傳物質，所以有這種防錯複製系統。rna重要性較低，所以沒有檔畝慶那麼精良的防錯系統。
dna會含有兩種引物嗎？
會的。乙個基因擴增四次，所得的dna中含有其中一種引物的共15個。為什麼。
請稍等～如果是雙鏈，第一次迴圈要棗納1對引物，第梁鍵二次要2對，第三次橡巖巧4對，第四次要8對。總共15對。上下游引物各15條。
好的，謝謝老師。
麻煩給個贊可以嘛。
點選結束諮詢哦。
謝謝啦。
pcr反應的引物有何種要求？
6樓：bie___汀
引物： 引物是pcr特異性反應的關鍵，pcr 產物的特異性取決於引物與模板dna互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板dna序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用pcr就可將模板dna在體外大量擴增。
設計引物應遵循以下原則：
引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
引物鹼基：g+c含量以40-60%為宜，g+c太少擴增效果不佳，g+c過多易出現非特異條帶。atgc最好隨機分佈，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3』端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
引物3』端的鹼基，特別是最末及倒數第二個鹼基，應嚴格要求配對，以避免因末端鹼基不配對而導致pcr失敗。
引物中有或能加上合適的酶切位點，被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子轉殖很有好處。
引物的特異性：引物應與核酸序列資料庫的其它序列無明顯同源性。
為什麼pcr引物中gc含量過多易出現非特異性條帶
7樓：匿名使用者
為什麼pcr引物。
中gc含量過多易出現非特異性。
條帶。gc含量高，說明解鏈溫度高，目的條帶在較高溫度才會解鏈，而在未達到解鏈溫度時，引物會以未完全解鏈的dna為模板，進行pcr非特異性擴增，所以易出現非特異性條帶。降低退火溫度。
dna復性減緩，增加非特異性互補機會，使非特異性條帶增多。
原因有很多：
最重要的可能性是pcr引物的特異性可能不夠好。
也有可能是退火溫度太低。
也有可能是buffer中鎂離子濃度太高。
還有可能是酶量太多，甘油太多，或者酶本身的特異性不太好。
當然還有可能是你的目的條帶本來就應該有許多條，這個你得根據自己的實驗進行具體分析了。
pcr擴增後沒有條帶是怎麼回事，PCR擴增後沒有條帶是怎麼回事
pcr的反應條件與很多引數有關係。如模板濃度，引物長度及gc含量，引物濃度，dntps濃度，選用的taq enzyme,緩衝液的離子含量，產物大小，變性時間，退火溫度及時間，延長的時間。物理原因 變性對pcr擴增來說相當重要，如變性溫度低，變性時間短，極有可能出現假陰性 退火溫度過低，可致非特異性擴...
PCR技術擴增目的基因是否一定要編碼區的基因
是的 只有編碼區的基因才可以控制合成蛋白質 當然，沒有的話擴增不了的 這兩個全部是胡說。只要有一定長度的dna模板，引物正確特異性好，pcr條件合適，就可以擴增模板，而模板是編碼還是非編碼沒有區別。跟合成不合成蛋白質更是無關，你擴增的是核酸不是氨基酸 而能不能擴增主要看你的模板和引物的選擇。目前發現...
考研是目的是什麼？考研有什麼用，考研的目的是什麼
激勵 以下三種考生考研 第一種是有志於深化本專業學習的考生。他們酷愛 本人 的專業，希望在本專業的科研和學術方面有所成就。第二種是為了興味 決議 放棄本專業的跨專業的考生。他們一心追求本人 人生的樂趣，真實 無可厚非。第三種是希望過關學習提升 或擴充套件本人 的知識層次的考生。他們可能曾經 參與 職...