1樓:匿名使用者
通常使用選擇培養基來篩選大腸桿菌。例如重組質粒上帶有抗四環素基因,那麼使用帶有四環素的選擇培養基,將
2樓:匿名使用者
一般超螺旋形態的質粒轉化效率更高~
如何將一個質粒dna轉入到大腸桿菌感受態細胞中
3樓:萘兒帕爾特管一
不對,通過轉化到感受態
細菌中,不是細胞.感受態的大腸桿菌,可以自己製作也可以通過購買回.之後答將細菌凃到含有抗生素的板子上,長出克隆後挑取單克隆,將單克隆加入含有抗生素的細菌培養基中培養,之後提取質粒,提取質粒可以購買相應的試劑盒,按照試劑盒的說明書操作即可.
質粒是帶有抗性基因的,只有含有該質粒的細菌才能在含有對應抗生素的培養基中存活並增殖,這樣就能確保是你的表達載體質粒.當然為了防止雜菌的汙染,整個過程中最好是無菌操作.而表達載體質粒有可能出現突變等情況,所以可以在提出質粒之後,取少量質粒送測序,來確保序列的無誤.
如何將一個質粒dna轉入到大腸桿菌感受態細胞中?並且如何鑑別是否轉化成功
4樓:匿名使用者
dna工程,還是高中的知識,所以可能不正確
先用dna剪下酶剪短質粒dna,然後把待轉dna用dna連線酶連線到斷裂處
鑑別則用培養基,看是否有轉入dna所期望達到的功能
質粒轉化為什麼只有一個質粒進入感受態細胞,同時進入幾個質粒有可能嗎?為什麼?謝謝!
5樓:阿魯巴星人
兩種質粒是可抄
以同時進入同一個感受態細胞的,比如構建腺病毒載體時。但是要求兩種質粒進入同一個感受態細胞,轉化效率非常低,一般需要電轉或者其他的特殊處理。
由於質粒的不相容性,擁有同種複製子的質粒不能在同一細胞內穩定共存,經過幾代的複製,會質粒丟失,所以並不是任何兩個或兩個以上質粒都可以在同一細胞內穩定存在,但是可以同時進入。
6樓:風與流年
你要知道質粒是dna呀,他在感受態細胞是可以複製的! 同時同時放入多個是浪費呀!
如何鑑別一個質粒dna成功轉入到大腸桿菌感受態細胞中
7樓:萬能星球
通常使用選擇培養基來篩選大腸桿菌。例如重組質粒上帶有抗四環素基因,那麼使用帶有四環素的選擇培養基,將待測大腸桿菌接種到選擇培養基,只有成功轉入重組質粒的大腸桿菌才能在選擇培養基生長
8樓:前雲嵐徭唱
不對,通過轉化到感受態細菌中,不是細胞.感受態的大腸桿菌,可以自己製作也可以通過購買.之後將細菌凃到含有抗生素的板子上,長出克隆後挑取單克隆,將單克隆加入含有抗生素的細菌培養基中培養,之後提取質粒,提取質粒可以購買相應的試劑盒,按照試劑盒的說明書操作即可.
質粒是帶有抗性基因的,只有含有該質粒的細菌才能在含有對應抗生素的培養基中存活並增殖,這樣就能確保是你的表達載體質粒.當然為了防止雜菌的汙染,整個過程中最好是無菌操作.而表達載體質粒有可能出現突變等情況,所以可以在提出質粒之後,取少量質粒送測序,來確保序列的無誤.
轉化感受態細胞的目的是什麼轉化感受態細胞的前因後果
9樓:匿名使用者
感受態細胞指的是經處理後,處於能吸收周圍環境中dna分子生理狀態的微生物細胞,在轉基因技術操作過程中要將重組dna分子匯入微生物受體細胞時就需要用感受態細胞。所謂轉化是目的基因進入受體細胞並在受體細胞中維持穩定和表達的過程。(1)質粒dna的質量和濃度,環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍,則會使轉化率下降;ml左右,且注意防止被其它試劑。
(應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同),大於30kb的重組質粒將很難進行轉化:所用的cacl2等試劑均需是最高純度的。對tg1菌株。
所有的試劑都要滅菌。對於以質粒為載體的重組分子而言: 用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的,並經高壓滅菌處理,1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。
一般地。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳,所用器皿,並用最純淨的水配製,細胞密度在5×107個/:整個操作過程均應在無菌條件下進行,分子量大的轉化效率低,移液槍頭等最好是新的,不能離開冰浴,重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關,否則細胞轉化率將會降低,可通過測定培養液的od600控制、dna酶或雜dna所汙染,轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比。
密度過高或不足均會使轉化率下降。不要用已經過多次轉接。(二)感受態細胞轉化中的影響。
(2)感受態細胞的質量。整個操作均需在冰上進行,但當加入的外源dna的量過多或體積過大時,dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%,實驗證明,及貯存在4°C的培養菌液,因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子,最好分裝儲存於4°C (3)細胞的生長狀態和密度 最好從-70°C或-20°C甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。即應用對數期或對數生長前期的細菌,否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入,od600為0.5時,如離心管
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