1樓:叔敏霍香天
如果t載體上沒有表達載體上需要的酶切位點,就要重新設計帶酶切位點的引物,pcr擴增t載體後酶切並連表達載體。如果t載體上有需要的酶切位點,直接酶切後**目的片段,連線表達載體即可。
2樓:取名不簡單的說
構建載體不需要引物啊。pcr才要。
設計pcr的引物時只要測出待擴增dna序列的兩端鹼基序列,然後人工合成很短的一段就夠了。
把目的基因連線到質粒上構建重組質粒時該如何選擇限制性內切酶?引物如何設計?
3樓:法師藥材店
重組時選復擇你的目的制基因上沒有,而質粒的多克隆位點上有的酶切位點,一般重組質粒需要兩個酶,所以你要選擇兩個酶切位點,注意儘量避免使用切出平末端的酶。重組引物設計時首先你要確定你選擇的兩個酶在的酶切位點在質粒的多克隆位點上的排列順序,這個不能錯,不然序列就會接反。一般設計重組引物的時候,在上游引物5』端前面加上載體多克隆位點排列在前面的酶切位點序列,在下游引物5『端前面則加上後面的一個酶切位點,酶切位點加好後,注意5』端還需要加上保護鹼基,這個具體你可以去查下內切酶的說明書。
然後你要注意,根據你的載體需要,是否要在引物上帶上啟動子和終止子。
質粒構建的引物是什麼
4樓:匿名使用者
如果是需要把一個特定的基因片段擴增後,插入到載體上構建質粒,則要根據載體上多克隆位點帶有的酶切位點,在自己的目標基因片段上下游都分別設計一段序列,並在設計的序列中引入載體上的酶切位點。這個時候設計出來,用於完成pcr擴增,並能夠在目標序列上下游都引入酶切位點的兩段序列就叫做質粒構建引物。
這樣擴增獲得的目標片段兩端就帶有了酶切位點,經過酶切後,與同樣經過酶切的載體就可以連到一起,形成環狀,完成質粒的構建。
5樓:匿名使用者
取決於你的片段.............
在構建基因表達載體時,除了要在重組DNA中插入目的基因外,還
事實上，載體上的各個部件類似工程中的各個功能模組，可以從分子生物版學知識中得出權。例如，載體需要複製，那必須有複製起點，若是表達載體，還需要有啟動子，終止子，上游調控原件等順式作用元件。此外，載體需要插入外源dna，故需要有多克隆酶切位點，成功表達載體的宿主需要被選擇出，所以需要有抗抗生素基因等選擇...
為什麼要先構建克隆載體再用表達載體
構建克隆載體是大量擴增dn 段，用以測序 酶切和改造等對dna實施的後續操作，構建表達載體是大量得到翻譯產物 蛋白質。為什麼要先構建克隆載體，再用表達載體，我猜是因為 得到大量的dna，雖然pcr也可以，但pcr擴增有出錯率 但你每做一次常規的pcr，而且每次都要重新提dna和rna才行，而且，pc...
急，如何構建原核表達載體？如何構建真核表達載體？（不要具體例子）
最簡單的就是用現有的載體就行改建，除非你自己做表達載體優化，一般實驗室都是用現成的載體，匯入目的片段那樣做得！真核表達載體就是多一個轉移片段，原理都是一樣的！急，如何構建原核表達載體 大體分為一下幾步 bai 1.設計目du的片段引 zhi物 含限制性酶切位點dao，要求 表達載體上有內而目的容片段...