1樓:聽風
設計好引物後,分別在上下游引物的5』端加上你所需要引入的酶切位點回就可以了。如果答pcr產物需要酶切,就需要加上保護鹼基。不同酶切位點所需要的保護鹼基是不一樣的,一般參考neb**上的一個保護鹼基表。
一搜就有了。如果不做pcr產物酶切而是直接連線t載體,就可以不加保護鹼基,pcr結束後直接加a連t,然後按流程操作就可以了。一般是需要轉化-驗證-測序,如果是構建表達載體的話還有酶切、連線、驗證。
構建質粒載體中用pcr獲得目的基因,其中涉及的引物為什麼要加酶切位點?難道不論載體都要加酶切位點嗎?
2樓:匿名使用者
獲得目的基因後一般需要將目的基因連線到質粒載體上,在引物上加酶切位點可以使後續的連線過程簡單、可控。因為可在載體和目的基因上酶切產生相同的切口。也有不需要加酶切位點的t載體,但連線過程效率不高還會有反向的錯誤連線。
3樓:士誠小人也
當然要根據不同的載體來選擇合適的酶切位點了,否則怎麼把目的片段連結到載體上?
4樓:匿名使用者
沒有酶切位點的話怎麼用限制性內切酶處理 沒處理的話怎麼連到載體上
5樓:東晶
那是針對你的目的基因上沒有載體上的酶切位點的情況!
pcr引物到底是什麼？在PCR過程中起什麼作用
pcr技術中的引物的 bai本質和作用。du 引物是一小 zhi段單鏈dna或rna，引物可以做為daodna複製專開始時dna聚合酶的結合位屬點，在細胞外的條件下，只有通過引物，dna才可以開始進行復制。引物是人工合成的兩段寡核苷酸序列，一個引物與感興趣區域一端的一條dna模板鏈互補，另一個引物與...
如何設計熒光定量pcr的引物及taqman探針
用專門的試劑盒來做吧，然後按照說明書操作，挺方便的。我們實驗室以前用的biog熒光定量pcr試劑盒，反應挺靈敏的，實驗結果也不錯，而且染料法和探針法都有。可以用引物設計軟體，primer5就挺不錯的。你是要檢測dna還是rna？探針法檢測dna的話可以用biog super probe kit，檢測...
如何理解pcr擴增的原理和過程，pcr擴增的原理和步驟
pcr反應和體內dna複製都是邊解旋邊複製，故 正確 pcr反應和體內dna複製都遵循鹼基互補配對原則，故 正確 pcr反應需要引物，但體內dna複製不需要引物，故 錯誤 pcr過程可分為變性 復性 延伸等步驟，而體內dna複製沒有這些步驟，故 錯誤。pcr的基本原理是什麼？其基本流程如何？一 基本...