1樓：北京索萊寶科技****
（1）相互作用
的蛋白質都是經翻譯後修飾的，處於天然狀態；
（2）蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的，可以避免人為的影響；
（3）可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白複合物。
免疫共沉澱定義：
免疫共沉澱（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是：
當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞記憶體在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質x的抗體免疫沉澱x，那麼與x在體內結合的蛋白質y也能沉澱下來。這種方法常用於測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用於確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。
免疫共沉澱的實驗過程：
（1）轉染後24-48 h 可收穫細胞，加入適量細胞裂解緩衝液（含蛋白酶抑制劑），冰上裂解30min, 細胞裂解液於4°c， 最大轉速離心30 min後取上清；
（2）取少量裂解液以備western blot分析，剩餘裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4°c緩慢搖晃孵育過夜；
（3）取10μl protein a 瓊脂糖珠，用適量裂解緩衝液洗3 次，每次3,000 rpm離心3 min；
（4）將預處理過的10μl protein a 瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°c緩慢搖晃孵育2-4h，使抗體與protein a瓊脂糖珠耦聯；
（5）免疫沉澱反應後，在4°c 以3,000 rpm 速度離心3 min，將瓊脂糖珠離心至管底；將上清小心吸去，瓊脂糖珠用1ml裂解緩衝液洗3－4次；最後加入15μl的2×sds 上樣緩衝液，沸水煮5分鐘；
（6）sds-page, western blotting或質譜儀分析。
注意的問題：
（1）細胞裂解採用溫和的裂解條件，不能破壞細胞記憶體在的所有蛋白質－蛋白質相互作用，多采用非離子變性劑（np40或triton x-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.
2%sds)，細胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cocktailer。
（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。
（3）使用對照抗體：
單克隆抗體：正常小鼠的igg或另一類單抗
兔多克隆抗體：正常兔igg
2樓：孤獨患者
（1）相互作用的蛋白質都是經翻譯後修飾的，處於天然狀態；
（2）蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的，可以避免人為的影響；
（3）可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白複合物。
免疫共沉澱和gst pull down技術各有何優勢？
3樓：116貝貝愛
免疫共沉澱的話蛋白質是處於天然狀態，可以分離得到天然狀態下相互作用的蛋白複合體。
gst pull-down是將gst融合蛋白作為探針固化到凝膠柱上，與溶液中的目的蛋白結合。可以用來確定融合（或探針）蛋白與未知（或靶）蛋白間的新的相互作用。
一、免疫共沉澱是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
二、當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞記憶體在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在argarose
beads上的蛋白質a的抗體免疫沉澱a蛋白，那麼與a蛋白在體內結合的蛋白質b也能一起沉澱下來。再通過蛋白變性分離，對b蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。
三、這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用於測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用於確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。
四、gst pull-down實驗是一個行之有效的驗證酵母雙雜交系統的體外試驗技術,近年來越來越受到廣大學者的青睞。其基本原理是將靶蛋白-gst（glutathione-s-transferase谷胱苷肽巰基轉移酶）融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當一種「誘餌蛋白」。
五、目的蛋白溶液過柱,可從中捕獲與之相互作用的「捕獲蛋白」(目的蛋白),洗脫結合物後通過sds-page電泳分析,從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應的目的蛋白,「誘餌蛋白」和「捕獲蛋白」均可通過細胞裂解物、純化的蛋白、表達系統以及體外轉錄翻譯系統等方法獲得。
免疫共沉澱和gst pull down技術各有何優勢
4樓：匿名使用者
都是用來研究蛋白質相互作用的技術
免疫共沉澱的話蛋白質是處於天然狀態，蛋白質的相互作用可以在天然狀態下進行，可以避免認為影響，還可以分離得到天然狀態下相互作用的蛋白複合體。
但是問題是兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；而且必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，如果抗體選錯了就沒有結果。
gst pull-down是將gst融合蛋白作為探針固化到凝膠柱上，與溶液中的目的蛋白結合。可以用來確定融合（或探針）蛋白與未知（或靶）蛋白間的新的相互作用，證實探針蛋白與已知蛋白質間可疑的相互作用。
但問題是這個方法可能會出現假陽性。也就是也許是因為電荷作用的影響造成的吸附，而不是生理性的相互作用。
請教做過免疫共沉澱的高手們談談該方法和用途
5樓：南大飛秒
飛秒檢測發現免疫共沉澱是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞記憶體在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。
當用預先固化在argarose beads上的蛋白質a的抗體免疫沉澱a蛋白，那麼與a蛋白在體內結合的蛋白質b也能一起沉澱下來。再通過蛋白變性分離，對b蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。
這種方法常用於測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用於確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。
免疫沉澱實驗的操作步驟比較多，同時由於在非變性條件下進行實驗，所以要得到一個完美的實驗結果，不僅需要高質量的抗體，同時對免疫沉澱體系也需要有嚴格的控制指標。免疫沉澱實驗從：蛋白樣品處理；抗體-agarose beads孵育；抗體-agarose beads複合物洗滌到最後的鑑定，每步都非常關鍵，需要嚴格控制實驗流程中每個關鍵步驟的質量，才能最終達到你的實驗目的。
其優點為：（1）相互作用的蛋白質都是經翻譯後修飾的，處於天然狀態；（2）蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的，可以避免人為的影響；（3）可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白複合物。缺點為：
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用； （3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
免疫共沉澱的缺點
6樓：北京索萊寶科技****
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；
（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；
（3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
（4）靈敏度沒有親和色譜高。
免疫共沉澱：
免疫共沉澱（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
免疫共沉澱的注意事項
(1) 確保共沉澱的蛋白是由所加入的抗體沉澱得到的，而並非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助於避免汙染的發生；
(2) 要確保抗體的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中新增抗體後不會引起共沉澱；
(3) 確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中，而不是由於細胞的溶解才發生的，這需要進行蛋白質的定位來確定。
7樓：▆▆▆丈
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；
（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；
（3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
（4）靈敏度沒有親和色譜高。
免疫共沉澱陰性對照的意義是什麼？
8樓：浙大阿米巴
因為要排出汙染的可能性。
比如你檢測一個兔子細胞的某種蛋白質，你沒有設定igg的對照，而操作中有非特異性蛋白質，又和你設計的抗體作用，那麼就出現了陽性結果。如果做了陰性對照，也就是igg對照，對照沒有出現陽性就說明沒有非特異性的蛋白，對照出現陽性，說明你的抗體有非特異結合的可能，需要重新開始實驗。
9樓：匿名使用者
怕你的目標蛋白能與抗體相互作用，比如說你要沉澱的蛋白跟金黃色葡萄球菌的a蛋白或補體很類似，你就無語了！
gst pull-down assay和免疫共沉澱的區別是什麼？
10樓：飛鴻love巨集
gst pull-down一般指用一個帶gst標籤的重組蛋白，與目的蛋白進行孵育，最後用結合gst的beads拉下相互作用複合物。
免疫共沉澱一般是用某一蛋白的抗體，在細胞裂解液中與相應的蛋白結果，用protein a/g將抗原抗體複合物拉下，最後在拉下的複合物中檢測目的蛋白的實驗。
二者都是用於檢測蛋白相互作用的實驗。
區別是pull-down一般是驗證 體外 相互作用；免疫共沉澱一般用於檢測細胞水平的 體內 相互作用。
什麼叫共沉澱現象？產生共沉澱現象的原因是什麼
共沉澱，一種沉澱從溶液中析出時，引起某些可溶性物質一起沉澱的現象。產生共沉澱的原因有 表面吸附，由於沉澱表面的離子電荷未達到平衡，它們的殘餘電荷吸引了溶液中帶相反電荷的離子。這種吸附是有選擇性的 首先，吸附晶格離子 其次，凡與晶格離子生成的鹽類溶解度越小的離子，就越容易被吸附 離子的價數愈高 濃度愈...
體液免疫應答的特點免疫應答的特點體液免疫初次應答的規律及再次免疫應答的臨床意義
一 初次免疫應答 抗原刺激機體產生抗體的過程，可分為 潛伏期 抗原已入侵，但抗體還無法檢出 對數期 抗體水平呈對數增長 平臺期 此期抗體含量相對穩定 下降期 與抗原結合或被降解，抗體含量逐漸下降。特點 1.潛伏期長 2.抗體量少 3.抗體型別以igm為主 4維持時間短 5.抗體特異性低 二 再次免疫...
DNF免疫膠囊任務怎麼開，DNF免疫膠囊的任務怎麼做
角色達到48 開啟主線任務表 未設定是q 土罐那個 收集材料 開命運應驗 要土罐人偶 有機率獲得開罐之王稱號 上交 找諾頓 找諾頓換票 免疫膠囊 dnf免疫膠囊的任務怎麼做 dnf中獲得免疫膠囊的任務過程如下 1.33級可以在奧菲麗亞那裡接到任務。2.然後找遊俠凱麗 3.然後去打50個章魚觸鬚。4....