1樓：北京索萊寶科技****
正常情況下是不需要的,溶解曲線是在sybr green法中利用染料在dna解鏈時釋放專不發射熒光,而在dna雙鏈屬時與其結合發射熒光的原理製作溶解曲線的,而taqman探針在pcr反應時其寡核苷酸鏈由於被dna聚合酶的外切酶活性給切斷,所以不能重新再結合故不能形成探針,所以不需要做溶解曲線.再一個,溶解曲線只是為反應體系中判斷是否有非特異性擴增提供一個側面的依據,適用於染料法.而探針法的特異性很高,從這方面來看也是不需要的.
定量pcr法中，taqman探針法需要做溶解曲線嗎？為什麼
2樓：北京索萊寶科技****
正常來情況下是不需要的,溶解曲線是在源sybr green法中利用染料在dna解鏈時釋放不發射熒光,而在dna雙鏈時與其結合發射熒光的原理製作溶解曲線的,而taqman探針在pcr反應時其寡核苷酸鏈由於被dna聚合酶的外切酶活性給切斷,所以不能重新再結合故不能形成探針,所以不需要做溶解曲線.再一個,溶解曲線只是為反應體系中判斷是否有非特異性擴增提供一個側面的依據,適用於染料法.而探針法的特異性很高,從這方面來看也是不需要的.
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
3樓：匿名使用者
這個用於syber green實時pcr。而使用探針的不需要。
因為syber green是非特異性結合，所以如果有非特異性的序列被擴增，也會同樣產生訊號。在設計引物的時候，可以計算出被擴增序列的tm。pcr反應完成以後，開始進行解離曲線的測量。
一般是對反應產物逐步加溫，每增加一度，測訊號一次。pcr產物會在溫度達到tm時發生解離，熒光訊號會一下子消失、如果把溫度和熒光訊號的變化做一個圖，就會看到一開始，熒光訊號沒有變化，是一個平直的線。達到tm附近是，會有一個比較銳利的峰，說明訊號的變化很大，繼續加熱超過tm，這是雙鏈都開啟了。
所以訊號也不會再有變化，所以又是平直的線。
如果產物都是特異性的，就是我上面說的那樣。如果有非特異性產物，就會出現不在tm就出現峰值，或者有矮而胖的峰值等等異常情況出現，這樣，那個管子的樣本就不能用了。
誰能具體解釋一下熒光定量pcr中溶解曲線的意思以及作用
4樓：匿名使用者
溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關係，擴增什麼基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似於電泳。那麼你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關係。出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組dna汙染的峰會在90℃以後。
出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因（也有可能是從加完反應液到上機開始pcr這之間的時間過長）所致；基因組dna那麼考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gdna的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板汙染，注意實驗操作等避免模板汙染。
詳細請見我的回答
5樓：表詠蒿樂蓉
用syber
green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。反應結束後，逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber
green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。
曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化！開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的，接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。
如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。
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