在熒光定量PCR中SYBR Green I為什麼結合了DNA才可以發出熒光，等到結合了才能檢測到熒光值

1樓：匿名使用者

只有在結合後，複合物的分子構型發生變化，可以吸收488nm的光能，然後發出522nm光。不結合，沒有分子構型變化，就不能吸收光能。

2樓：匿名使用者

以前我問過我們老師他說原理和跑電泳是加gvii一樣

3樓：

sybr green i 含有一個可以嵌入dna堆積鹼基之間的一個三環平面基團。它與dna的結合沒有鹼基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中，大約每2-5個鹼基插入一個熒光素顏料分子。

當染料分子插入後，其平面基團與螺旋的軸線垂直並通過範德華力與上下鹼基相互作用。這個基團的固定位置及其與鹼基的密切接近，導致與dna結合的染料呈現熒光，其熒光產率比遊離溶液中染料有所增加。dna吸收254nm處的紫外輻射並傳遞給染料，而被結合的染料本身吸收476nm-509nm的光輻射。

這兩種情況下，被吸收的能量在可見光譜綠色區的520nm處重新發射出來。與雙鏈 dna 接合的 sybr green i 呈現綠色熒光。而單鏈 dna 則顏色為橘黃而不是綠色。

實時熒光定量pcr的原理

4樓：匿名使用者

熒光定量pcr原理：隨著pcr反應的進行，pcr反應產物不斷累計，熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。

熒光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為熒光探針（bioghc elitefast sybr kit）和熒光染料（bioghsc super probe kit）

5樓：匿名使用者

所謂的實時熒光定量 pcr 就是通過對 pcr 擴增反應中每一個迴圈產物熒光訊號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。其原理是在實時熒光定量 pcr 反應中，引入了一種熒光化學物質，隨著

pcr 反應的進行， pcr 反應產物不斷累計，熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。

為什麼實時熒光定量pcr做不出來，普通pcr可以

6樓：匿名使用者

為什麼實時熒光定量pcr做不出來，普通pcr可以普通的pcr大多數是定性實驗回

，而實時熒光定量pcr則定量和答定性都可以做。應用領域也不一樣，普通pcr一般應用於基因組克隆、dna測序、rna反轉錄等，而實時熒光定量pcr一般應用於mrna表達量分析、絕對定量、蛋白表達、snp分析、陰陽性解析等領域。不是定量pcr比pcr好，而是兩者應用與不同的領域，起到了不同的作用。

熒光定量pcr較普通pcr不同的一點就是可以實時檢測pcr擴增產物，從而可進行絕對定量或者相對定量。

實時熒光定量pcr中什麼可以不需要延伸階段

7樓：匿名使用者

1.sybrgreenⅰ法：

在pcr反應體系中，加入過量sybr熒光染料，sybr熒光染料特異性地摻入dna雙鏈後，發射熒光訊號，而不摻入鏈中的sybr染料分子不會發射任何熒光訊號，從而保證熒光訊號的增加與pcr產物的增加完全同步。

sybr定量pcr擴增熒光曲線圖

pcr產物熔解曲線圖（單一峰圖表明pcr擴增產物的單一性）2.taqman探針法：

探針完整時，報告基團發射的熒光訊號被淬滅基團吸收；pcr擴增時，taq酶的5』-3』外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光訊號，即每擴增一條dna鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光訊號的累積與pcr產物的形成完全同步。