1樓：而成哦
要看陽性對照和陰抄性對照，陰性對照沒有熒光，陽性對照有熒光，重複一次結果穩定的話就可以說是陽性了。樣品的稀釋度要看蛋白的表達量，用你們實驗室的標準protocol先做一遍，結果不好再優化條件。定量是可以的，要做western blot和elisa，但也只是相對定量，不是絕對定量，把你檢測的結果儲存一張比較好的**，背景清晰，結果穩定的。
用影象軟體處理，把你空白對照組所出現的結果明暗度設定為1，在比較實驗組的結果，得出的百分比就是半定量的結果。
細胞免疫熒光陽性表達一定要定量的嗎
2樓：匿名使用者
要看陽性對照
bai和陰性對照，陰
du性對照沒有熒光zhi，陽性對照有熒光，dao重複一次結果穩定的話就可回
以說是陽性了。答樣品的稀釋度要看蛋白的表達量，用你們實驗室的標準protocol先做一遍，結果不好再優化條件。定量是可以的，要做western blot和elisa，但也只是相對定量，不是絕對定量，把你檢測的結果儲存一張比較好的**，背景清晰，結果穩定的。
用影象軟體處理，把你空白對照組所出現的結果明暗度設定為1，在比較實驗組的結果，得出的百分比就是半定量的結果。
細胞免疫熒光，求助
3樓：南京金益柏生物科技****
細胞爬片免疫熒光實驗步驟
第一天：
1. 在培養板中將已爬好細胞的玻片用pbs浸洗3次，每次3min；
2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， pbs浸洗玻片3次，每次3min；
3. 0.5%triton x-100( pbs配製 )室溫通透20min（細胞膜上表達的抗原省略此步驟）；
4. pbs浸洗玻片3次，每次3 min，吸水紙吸乾pbs，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30min；
5. 吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗並放入溼盒，4℃孵育過夜；
第二天：
6. 加熒光二抗： pbst 浸洗爬片3次，每次3min，吸水紙吸乾爬片上多餘液體後滴加稀釋好的熒光二抗，溼盒中20-37℃孵育1h，pbst浸洗切片3次，每次3min；
注意：從加熒光二抗起，後面所有操作步驟都儘量在較暗處進行。
7. 復染核：滴加dapi避光孵育5min，對標本進行染核，pbst 5min×4次洗去多餘的dapi；
8. 用吸水紙吸乾爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然後在熒光顯微鏡下觀察採集影象。
細胞免疫熒光的幾個問題
4樓：匿名使用者
要看陽性復對照和陰性制對照，陰性對照沒有熒光，陽性對照有熒光，重複一次結果穩定的話就可以說是陽性了。樣品的稀釋度要看蛋白的表達量，用你們實驗室的標準protocol先做一遍，結果不好再優化條件。定量是可以的，要做westernblot和elisa，但也只是相對定量，不是絕對定量，把你檢測的結果儲存一張比較好的**，背景清晰，結果穩定的。
用影象軟體處理，把你空白對照組所出現的結果明暗度設定為1，在比較實驗組的結果，得出的百分比就是半定量的結果。
關於細胞免疫熒光染色的問題
5樓：匿名使用者
(1)你的二抗是用fitc標記的，為避免熒光分解，分裝及熒光顯微鏡觀察時均要避光;
(2)封片最好用甘油加0.5mmol/l ph9.0-9.5的碳酸氫鹽緩衝液，後者能使玻片透明;
(3)關於免疫酶染色，如果是用過氧化物酶做標記，就必須用3%h2o2以去除內源性過氧化物酶;2n鹽酸需要使用，目的是使dna變性，讓brdu抗體能夠充分地與已經摻入的brdu結合。
做間接法免疫熒光染色，如何設定對照?
參考見解:最好是同一視野在未用熒光激發下進行對照，看是否非特異性染色。
(1)空白對照:如果你做的是石蠟切片免疫組化，這個對照必須有，目的是看自發熒光，脫蠟後直接在熒光顯微鏡下觀察。
(2)陰性對照:標本直接滴加二抗，呈陰性反應。
(3)抗原對照:標本加同種動物的未免疫血清，以pbs沖洗後，在加抗免疫球蛋白熒光抗體。因未免疫動物的血清中無特異性抗體，應呈陰性反應。
求助：細胞膜蛋白免疫熒光染色問題
繼續求助免疫熒光檢測nf
6樓：南京金益柏生物科技****
由於nf－kb採用免疫熒光檢測可能會出現非特異性結合，一般轉核觀察nf-kb採用熒光效果欠佳，建議是否考慮採用鐳射共聚焦檢測，其效果要比前者好多了。供參考。
細胞鑑定是免疫熒光還是免疫組化
7樓：北京索萊寶科技****
免疫組化和免疫熒光都是蛋白定位的檢測（也就是確定蛋白是表達在細胞核/漿/膜）。
免疫組織化學又稱免疫細胞化學，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，藉助顯微鏡的現像和放大作用，在細胞，亞細胞水平檢測各種抗原物質，並可在原位顯示相應的基因和基因表達產物。免疫組織化學技術現已有：
免疫熒光組織（細胞）化學技術、免疫酶組織（細胞）化學技術、親和組織化學技術、免疫金銀及鐵標記免疫組織化學技術等。免疫熒光組織（細胞）化學技術是採用熒光素標記的已知抗體（或抗原）作為探針，檢測待測組織、細胞標本中的靶抗原（或抗體），形成的抗原抗體複合物上帶有熒光素，在熒光顯微鏡下，由於受高壓汞燈光源的紫外光照射，熒光素髮出明亮的熒光，這樣就可以分辨出抗原（或抗體）的所在位置及其性質，並可利用熒光定量技術計算抗原的含量。以達到對抗原物質定位、定性、定量測定的目的。
細胞免疫熒光求助,求助細胞免疫熒光的詳細操作步驟
細胞免疫熒光的詳細du操作步zhi驟 1,取出細胞爬片放到35mm或60mm用過dao的細胞內培養皿裡,pbs洗三遍。注意容有的時候作的細胞爬片可能比較小,因此夾取的時候要小心。2,4 多聚甲醛固定20分鐘,pbs洗三遍。3,0.2 triton x 100通透10分鐘,pbs洗三遍。4,與二抗相同...
細胞免疫熒光,求助,繼續求助免疫熒光檢測NF
細胞免疫熒光記得先上圖,要不我們也不知道如何幫你啊,對吧 細胞免疫熒光,求助 細胞爬片免疫熒光實驗步驟 第一天 1.在培養板中將已爬好細胞的玻片用pbs浸洗3次,每次3min 2.用4 的多聚甲醛固定爬片15min,pbs浸洗玻片3次,每次3min 3.0.5 triton x 100 pbs配製 ...
細胞固定不好以及免疫熒光背景強怎麼辦
補充 一抗用的abcam的,1 200稀釋 二抗用的國產的中杉金橋的,1 50稀釋的。細胞免疫熒光失敗原因求教,細胞免疫熒光 首先你應bai該確認老鼠是不是du轉基因老鼠,會不會有自zhi發熒光的產生 dao。其次,二專抗就是熒光染料,屬只要加了二抗,就會有熒光的產生,所以需要在加完二抗後用pbs洗...