做間接法免疫熒光染色，如何設定對照

1樓：匿名使用者

(1)空白對照：如果你做的是石蠟切片免疫組化，這個對照必須有，目的是看自版發熒光，脫權蠟後直接在熒光顯微鏡下觀察。

(2)陰性對照：標本直接滴加二抗，呈陰性反應。

(3)抗原對照：標本加同種動物的未免疫血清，以pbs沖洗後，在加抗免疫球蛋白熒光抗體。因未免疫動物的血清中無特異性抗體，應呈陰性反應。

生物幫上面有這方面的資料。

我的熒光免疫染色出了什麼問題

免疫熒光染色的詳細步驟及應注意的細節

2樓：南京金益柏生物科技****

免疫熒光染色方法快捷,靈敏.

標本是冰凍切片,還是石蠟切片?切片的厚薄?影響到一抗孵育的時間.

選用較佳的一抗的工作濃度.

二抗需a液b液在室溫混合15分鐘後再用.

標本需儲存在-20度.

直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的異同

3樓：糖豆豆

1、接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的不同：

直接免疫熒光的實驗方案通常較短，因為它只需要一個標記步驟。間接免疫熒光使用偶聯二抗檢測一抗會增加額外的操作步驟。

直接免疫熒光方法的實驗方案步驟較少，更簡單。間接免疫熒光方法中必須選擇適當的二抗，增加了複雜度。這種情況在需要使用多個二抗的多色實驗中尤為突出，每個二抗需要靶向不同的物種並偶聯至不同染料。

直接免疫熒光方法中獲得的訊號與間接方法相比可能較弱，因為直接方法中沒有使用二抗進行訊號放大。免疫熒光多個二抗結合一抗可使訊號放大。

2、直接免疫熒光和間接免疫熒光染色方法的相同之處：

免疫熒光 (if) 或細胞成像技術使用抗體將熒光染料（也稱為熒光素或熒光物）標記到特異性目標抗原上，所用熒光染料有諸如異硫氰酸熒光素 (fitc) 等。而通過化學方法偶聯熒光素的抗體被廣泛使用於if實驗中。

根據熒光素與一抗還是二抗偶聯，我們將 if 方法分為兩類：直接 if-使用單個抗體，該抗體直接指向目的靶標，一抗與熒光素直接偶聯；間接 if-使用兩個抗體，一抗未偶聯，熒光素偶聯的二抗指向一抗，並用於檢測。

間接法測抗體基本原理：

染色程式分為兩步，第一步，用未知未標記的抗體（待檢標本）加到已知抗原標本上，在溼盒中37℃保溫30min，使抗原抗體充分結合，然後洗滌，除去未結合的抗體。

第二步，加上熒游標記的抗球蛋白抗體或抗igg、igm抗體。如果第一步發生了抗原抗體反應，標記的抗球蛋白抗體就會和已結合抗原的抗體進一步結合，從而可鑑定未知抗體。

4樓：天蠍神經俠侶

免疫熒光細胞化學方法的原理是根據抗原抗體

fitc標記的二抗是綠熒光還是紅熒光

5樓：

5mmol#47。

(3)抗原對照?

參考見解。因未免疫動物的血清中無特異性抗體:標本直接滴加二抗:

標本加同回種動物的未免疫答血清:最好是同一視野在未用熒光激發下進行對照:如果你做的是石蠟切片免疫組化，看是否非特異性染色，應呈陰性反應(1)你的二抗是用fitc標記的，目的是使dna變性;2n鹽酸需要使用，呈陰性反應，如果是用過氧化物酶做標記.

0-9，為避免熒光分解，後者能使玻片透明，分裝及熒光顯微鏡觀察時均要避光，在加抗免疫球蛋白熒光抗體;l ph9，這個對照必須有。

做間接法免疫熒光染色，目的是看自發熒光，以pbs沖洗後，如何設定對照.5的碳酸氫鹽緩衝液;

(3)關於免疫酶染色。

(2)陰性對照，脫蠟後直接在熒光顯微鏡下觀察，就必須用3%h2o2以去除內源性過氧化物酶。

(1)空白對照，讓brdu抗體能夠充分地與已經摻入的brdu結合;

(2)封片最好用甘油加0