1樓:匿名使用者
在94度時,所有雙鏈都是解離狀態,自由碰撞。由於溫度過高,及時互補鏈相遇,也無法形成氫鍵。
當溫度向55度降低時,互補鍊形成氫鍵的機率逐漸增大,由於引物的濃度大大超過以擴增的互補鏈,所以引物和互補鏈的結合開始增多,溫度降低到引物的tm溫度時,理論上已經有一般的互補鏈已經和引物結合了。降到55度時,結合基本完成,taq酶也到位。
溫度升到72度後,taq獲得最適溫度,活性增高,開始合成新鏈。再次升高溫度時,根據模板的長短,如果是原始的模板,taq酶還正在合成新鏈,合成被打斷。如果模板是新合成的,比較短,這時taq已經到了新合成連的末端,並且給末端加了個核苷酸-a.
這個也就是為什麼pcr產物其實是粘性末端:
************-a
a-************
上面一條是5‘-3’,下面是互補 (示意圖)
2樓:匿名使用者
94度是變性溫度,在這個溫度下dna雙鏈開啟,72度是延伸溫度,這個溫度是dna聚合酶進行延伸的溫度,不一定延伸溫度都是72度,不同**的聚合酶延伸溫度不同,這兩個溫度基本都是由使用的聚合酶決定的,55度是退火溫度,是由你設計的引物決定的,在這個溫度下你的引物可以跟模版鏈特異性結合,一圈完整的pcr反應應該是94度變性,dna雙鏈開啟,55度退火,上下游引物分別與你的模板鏈特異性結合,最後是72度延伸,以模板鏈為複製模板,按照5'到3'的方向從引物的3'端開始往後延伸
3樓:
94℃時dna雙鏈發生解鏈,55℃時引物與模板dna鏈結合,72℃時結合了模板鏈的引物以其互補鏈為模板進行延伸。
之間是什麼意思?指降溫的過程?降溫是在很短的時間內完成的,中間的反應幾乎可以忽略不計。
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