1樓：匿名使用者
用專門的試劑盒來做吧，然後按照說明書操作，挺方便的。我們實驗室以前用的biog熒光定量pcr試劑盒，反應挺靈敏的，實驗結果也不錯，而且染料法和探針法都有。
2樓：匿名使用者
可以用引物設計軟體，primer5就挺不錯的。你是要檢測dna還是rna？探針法檢測dna的話可以用biog super probe kit，檢測rna的話可以用biog super prob one step kit。
普通pcr引物設計和熒光定量pcr引物設計的區別
3樓：匿名使用者
一、方法不同
來1、普自通pcr引物設計：引物的優劣直接關係到pcr的特異性與成功與否。
2、熒光定量pcr引物設計：通過熒光染料或熒游標記的特異性探針，標記跟蹤pcr產物進行實時監測反應，利用與之相適應的軟體對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度
二、原理不同
1、普通pcr引物設計：為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板dna序列。
2、熒光定量pcr引物設計：在pcr反應體系中加入熒光基團，通過熒光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程，然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量pcr中，對全程pcr擴增過程進行實時檢測，根據反應時間和熒光訊號的變化可以繪製成一條曲線。
三、注意事項不同
1、普通pcr引物設計：引物應用核酸系列保守區內設計並具有特異性。產物不能形成二級結構。引物長度在15~30鹼基之間。
2、熒光定量pcr引物設計：實時熒光定量 pcr 儀應安放在溼度較低、灰塵較少、遠離水池的平穩檯面上，不能有強光直射，室內應通風良好，無腐蝕性氣體
4樓：南京金益柏生物科技****
實時定量bai的引物設計du要求比較高，可
以按zhi普通引物設計的方法來做，dao但是回設計時要注意擴增的片段答不能太大，最好在250bp-100bp之間。同時要保證這對引物有絕對的特異性，因為要是產生非特異性擴增的話，就不能準確的計量模板量了，這樣就失去了實時定...
5樓：
實時定量的引物抄
設計要求比較高，可以按普通bai引物設計的方法來做，但du是設計時要注zhi意擴增的片段dao不能太大，最好在250bp-100bp之間。同時要保證這對引物有絕對的特異性，因為要是產生非特異性擴增的話，就不能準確的計量模板量了，這樣就失去了實時定...
6樓：
建議來你還是選擇cds區不一自樣的地方設計bai引物吧，這樣可以避免du交叉汙染引起zhi的非特異擴增，dao擴增的序列長度不一定要一樣，每個引物你最好設計兩三對，然後做一個相對定量看看不同引物的擴增效率，選擇比較好的兩對引物做後續試驗，內參基因的引物不需...
7樓：
nf-kbmrna不就是nf-kb的mrna麼 做定量pcr就是測它mrna的表達量啊 nf-kbp65是nf-kb3 nf-kbp52是nf-kb2 所以這兩個還是有區別的 如果你是要檢測65的話
怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線
熒光定量pcr的溶解曲線理解 用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。應結束後，逐漸加溫。和syber green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber green結合。一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。...
求助關於熒光定量PCR的CT值問題
怎麼了,熒光訊號值達到設定閾值所需的迴圈數就是ct值 求助關於熒光定量pcr的ct值問題 如果有標準曲線,按照標準曲線計算。一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下 對照組基因a的ct值為20,內參 比如 actin ct值15。實驗組基因a ct值18,內參ct值14。...
求助關於熒光定量PCR的CT值問題
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下 對照組基因a的ct值為20，內參 比如 actin ct值15。實驗組基因a ct值18，內參ct值14。首先算加樣量 delta ct 15 14 1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對...