氧化酵素試驗的原理,方法步驟及結果

2023-02-24 23:05:30 字數 794 閱讀 6373

1樓:匿名使用者

原理:根據細胞色素氧化酵素(cytochrome oxidase)之作用作為細菌組別之區分。

有氧呼吸過程中,氧化酵素(oxidase)對於電子傳送系統扮演一重要角色,其可借氧分子將已還原的細胞色素(reduced cytochrome)氧化,產生水或過氧化氫。

好氧菌與部份兼性厭氧菌及微好氧菌均具氧化酵素之作用,本實驗有助於區分奈瑟氏菌屬(neisseria)、假單胞桿菌屬(pseudomonas)此二屬為氧化酵素陽性(oxidase positive),與腸道桿菌科(enterobacteriaceae)此科之細菌為氧化酵素陰性(oxidase negative)。

測定細菌產生氧化酵素之能力,可將p-aminodimethylaniline oxalate試劑滴於平板上之菌落,此淡粉紅色試劑可作為人工受質,在氧化酵素與遊離氧存在下提供電子而被氧化為黑色化合物,使菌落表面呈黑色,表陽性結果。若菌落無顏色變化或呈淡粉紅色,表明氧化酵素活性為陰性結果。亦可使用tetramethyl-p-phenylenediamine 2hcl試劑,此試劑為淡藍色,若菌落呈深藍紫色,表陽性結果,無顏色變化為陰性結果。

步驟:1,將trypticase soy agar plate以油性筆劃分為三區,每區分別標示欲接種之菌名,並編上組別。

2,無菌操作,於各區內分單一劃線接種所標示之細菌。

3, 將平板倒放於37℃培養箱,培養24-48小時。

結果:滴加2-3滴試劑於測試菌之菌落表面。 觀察菌落表面是否在30秒內轉變為深藍紫色,並將結果記錄於**中。 依觀察所見,判斷各菌產生氧化酵素之能力,並將結果記錄於**中。

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