大腸桿菌的轉化原理及方法,大腸桿菌轉化除了感受態細胞轉化方法外,還有哪些方法

2021-03-27 10:48:06 字數 1213 閱讀 7045

1樓:正保醫學教育網

所謂的轉化是將外源dna分子引入受體細胞,使之獲得新的遺傳性狀的一種手段,它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領域的基本實驗技術。

在自然條件下,很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內,但在人工構建的質粒載體中,一般缺乏此種轉移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需將質粒載體轉移進受體細菌,需誘導受體細菌產生一種短暫的感受態以攝取外源dna。細胞處於能夠吸收dna的狀態稱感受態,處於感受態的細胞稱作感受態細胞。

轉化過程所用的受體細胞一般是限制修飾系統缺陷的變異株,即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變體(rˉ,mˉ),它可以容忍外源dna分子進入體內並穩定地遺傳給後代。受體細胞經過一些特殊方法的處理後,細胞膜的通透性發生了暫時性的改變,成為能允許外源dna分子進入的感受態細胞。進入受體細胞的dna分子通過複製,表達實現遺傳資訊的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。

將經過轉化後的細胞在篩選培養基中培養,即可篩選出轉化子(即帶有異源dna分子的受體細胞)。

當質粒轉化進大腸桿菌時,通過什麼原理表達目的基因

2樓:聽風

當質粒來轉化進大腸桿菌時,通過源dna複製原理表達目的基因。

baicacl2對特定du的大腸桿菌處理,製備感受zhi態的細菌。dao這些細菌可使每微克超螺旋質粒dna,如一些插入目的dn**段的重組質粒,產生5×106~2×107 個轉化的菌落。當質粒與這些大腸桿菌混合後,質粒粘附在大腸桿菌的表面,在42℃的溫度時,大腸桿菌出現熱休克,質粒可通過大腸桿菌細胞膜上形成的空隙進入菌體內。

隨後,加入lb培養液,於37℃振動培養可使細菌復甦,並且表達質粒編碼的抗生素抗性基因,提高轉化效率。轉化成功的大腸桿菌可以在相應抗生素培養皿中傳代,形成菌落。

由於大腸桿菌繁殖快,在適宜的條件下繁殖一代僅需要20~30分鐘,而且常用質粒可以在大腸桿菌中達到幾百個拷貝,因此,通過對轉化成功的大腸桿菌培養,可以在短時內極大地擴增目的質粒。(作為分子生物學用大腸桿菌,是經過實驗室改造過的工程菌。)

大腸桿菌轉化除了感受態細胞轉化方法外,還有哪些方法

3樓:阿魯巴星人

做成抄感受態轉化外源核酸襲是最常用也是最高效的辦法。

在自然界中,本來就存在著概率極低的轉化。此外,大腸桿菌的接合轉化應該算自然界中基因交流常見的一種方式了,實驗室也有很多運用,但是這種轉化方式對實驗室的要求較高。

對大腸桿菌敏感的抗生素有哪些,對大腸桿菌敏感的抗生素有哪些

有很多種,卡納黴素 慶大黴素,沙星利菌沙等等一類。抗菌優,卡那黴素,恩諾沙星等。大腸桿菌對抗生素的敏感性如何 它們都屬於氨基糖抄 苷類類抗生bai素,對革蘭氏陰性菌都du 有較強的作用。一 鏈zhi 黴素 抗菌譜及臨dao床應用 1.對結核 鼠疫桿菌作用強 各型結核 鼠疫 兔熱病 2.對革蘭氏陰性桿...

大腸桿菌BL21和DH5的區別,大腸桿菌bl21為什麼可以用來表達蛋白

dh5 是擴增菌,bl21是表達菌 前者可以實現 互補,後者不可以 後者更適合用於蛋白表達dh5 可以使質粒高拷貝數擴增,bl21利於蛋白的表達,另外表達菌還有很多,ps系列,roset系列等望採納 大腸桿菌bl21為什麼可以用來表達蛋白?不行的,一般克隆bai用菌如dh5 du質粒高拷貝zhi,但...

大腸桿菌感受態細胞轉化實驗正負對照

轉化a.將 70 0c下保bai存的感受態細胞 du200 l 室溫下 zhi解凍後放置於冰上。dao b.將nd pucm t質粒dna溶液 不超過50ng 或回pcr產物與pucm t質粒的答連結產物,體積不超過10 l,輕輕搖勻,冰上放置30min。c.42 0c水浴中熱擊90s或370c水浴...