1樓:匿名使用者
好像是bai這麼回事:(我當時du沒有認真聽zhi講)冷凍和cacl2使得dao
細胞膜變得脆(流動內性差),這時進行熱容擊過程容易使其出現孔洞,使得dna可以進到細胞裡。
溫度是比較高的,時間長的話細胞容易死掉。(我們當時做的是120秒)溫度低則效果不好。
後一問不清楚。
2樓:匿名使用者
可能是特定的熱穩定dna聚合酶作用的最適溫度及時間吧。擾動轉化體系的話,可能由於解鏈與復性過程中dna分子的不穩定,會導致拷貝擴曾出現異常吧。
關於表達質粒轉化bl21(de3)的問題
3樓:匿名使用者
轉化成功的e.coli細胞會帶有kana抗性,不怕kana,沒轉化成功的無法在含有kana的瓊脂板子上生長。不需要藍白斑,就挑取能在上面生長的菌落就可以了,那些都是已經成功轉化、帶有質粒的菌。
感受態細胞的轉化要注意些什麼
4樓:匿名使用者
注意事項:
1.實驗中所需氯化鈣於冰浴後再使用
2.使用離心機前,要嚴格保證離心物品充分平衡,以免造成離心機損傷3.大腸桿菌感受態一定放冰上溶化
4.熱激和冰浴時間要科學把握
5樓:匿名使用者
此外(1)質粒dna的質量和濃度,環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍,則會使轉化率下降;ml左右,且注意防止被其它試劑。(應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同),大於30kb的重組質粒將很難進行轉化:所用的cacl2等試劑均需是最高純度的。
對tg1菌株。所有的試劑都要滅菌。對於以質粒為載體的重組分子而言:
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的,並經高壓滅菌處理,1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。一般地。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳,所用器皿,並用最純淨的水配製,細胞密度在5×107個/:
整個操作過程均應在無菌條件下進行,分子量大的轉化效率低,移液槍頭等最好是新的,不能離開冰浴,重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關,否則細胞轉化率將會降低,可通過測定培養液的od600控制、dna酶或雜dna所汙染,轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比。密度過高或不足均會使轉化率下降。不要用已經過多次轉接。
(二)感受態細胞轉化中的影響。(2)感受態細胞的質量。整個操作均需在冰上進行,但當加入的外源dna的量過多或體積過大時,dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%,實驗證明,及貯存在4°C的培養菌液,因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子,最好分裝儲存於4°C (3)細胞的生長狀態和密度 最好從-70°C或-20°C甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。
即應用對數期或對數生長前期的細菌,否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入,od600為0.5時,如離心管
質粒和目的基因的問題急,關於質粒的問題。
是把目的基因連到了質粒的切口上。至於你說的什麼重組產物種質粒和質粒的結合 完全不明白你在說什麼 重組產物已經沒有粘性末端留出來 不可能兩個質粒重組 也不可能有什麼重新修復 是兩個質粒的重組,因為是同一種限制酶切割的,兩個質粒可以重組。而且既然是質粒與質粒,就是指兩個質粒間的重組。dna連線酶連線時,...
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關於硫酸鋇和碳酸鋇之間轉化的問題
1 baso4 ba2 so42 ksp baso4 2 baco3 ba2 co32 ksp baco3 1 2 得 baso4 co32 baco3 so42 k ksp baso4 ksp baco3 又，k c so42 c co32 若反應平衡儘量向右，即轉化為baco3，則c co32 ...