1樓:威海博銳化機
一、表達載體不同:
原核表達載體構建重組表達載體:
1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳後,用膠**kit或凍融法**載體大片段。
2、pcr產物雙酶切後**,在t4dna連線酶作用下連線入載體。
真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體,具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。
二、表達實現方式不同:
真核表達載體具有neo基因,可以採用g418來篩選已成功轉染了該載體的靶細胞。這些特殊的結構可以實現目的基因在靶細胞內的穩定表達。
三、獲得目的基因方式不同:
pegfp-n1載體從結構上看,質粒具有很強的複製能力,可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞,這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。
原核表達載體獲得目的基因:
1、通過pcr方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),pcr迴圈獲得所需基因片段。
2、通過rt-pcr方法:提取總rna,以mrna為模板,逆轉錄形成cdna第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行pcr迴圈獲得產物。
2樓:匿名使用者
原核載體可以將真核基因表達,但是表達出來的蛋白是沒有活性的,因為缺少翻譯後修飾系統。。。真核的表達載體呢 由於比較大 不適合大量快速擴增,所以要在其載體上構建可以在原核生物 如大腸桿菌中複製的所需的複製原件 。。。。綜上 在應用的時候 要構建 穿梭質粒 可以穿梭於 原核和 真核 呵呵 還有就是 原核表達載體的基本元件和真核的有不同的地方 。。。。。
總覺得不夠正確答案 。。。。。有些人緣的蛋白在原核裡沒有蛋白翻譯後修飾,表達後沒有活性,這時候就得在真核裡表......
3樓:匿名使用者
主要是因為原核和真核表達系統所需的表達元件不同。
比如說啟動子,終止子在兩種表達系統中是不一樣的。
帶有真核表達元件的是真核載體,能在真核生物內表達;
帶有原核表達元件的是原核載體,能在原核生物內表達。
兩者都具有的為穿梭載體。
1)真核表達載體和原核表達載體就是能在真核生物或原核生物中表達的載體,它們一般都帶有能在真核生物或原核生物中表達的必需表達元件;
2)真核表達和原核表達的目的都是為了能夠大量獲得自己所需要的目的基因的表達產物,最好有生物活性,以便下一步的實驗需要.
3)原核表達載體一般只能在原核生物中表達外源基因,但有些穿梭載體可以分別在真核和原核生物中表達它們的表達元件.
真核表達載體和原核表達載體的區別越詳細越全面越好
4樓:天馬行空設計
應該是bai原核表達宿主du菌比較準確 原核表達zhi宿主菌之前可以表達蛋白dao,版放一段時間不表達權蛋白原因很多 首先要確認其他條件是否也有改變,比如其他基因,質粒載體,表達條件等等 原核表達宿主菌儲存條件沒有控制好可能導致宿主菌退化,被汙染等等,結果。能抑制多長時間你需要自己檢測。不同細胞、不同sirna、不同轉染試劑都會影響效率。
但是假設你轉染之後48小時或者72小時之後passage 細胞做mtt或者克隆形成實驗,個人覺得是可以的(前提是你有48小時或72小時knockdown證據)。
真核表達載體和原核表達載體的區別 30
5樓:函沙褒瑩玉
原核bai載體可以將真核基因表達,du
但是表達出zhi來的蛋白dao
是沒有活性的,因專為缺少翻譯後修飾系統屬。。。真核的表達載體呢由於比較大
不適合大量快copy速擴增,所以要在其載體上構建可以在原核生物如大腸桿菌中複製的所需的復知制原件
。。。。綜上
在應用的時候
要構建穿梭質粒
可以穿梭於
原核和真核
呵呵還有就是
原核表達道載體的基本元件和真核的有不同的地方。。。。。總覺得不夠正確答案
。。。。。有些人緣的蛋白在原核裡沒有蛋白翻譯後修飾,表達後沒有活性,這時候就得在真核裡表......
6樓:南霧嶺後
1 啟動子不同,真核細胞需真核啟動子
2 轉錄終止序列不同。
3,複製子不同。
其他都差不多
7樓:道玄師兄
主要是因為原核和真核表達系統所需的表達元件不同。
比如說啟動子,終止子在兩種表達系版
統中是不一樣權的。
帶有真核表達元件的是真核載體,能在真核生物內表達;
帶有原核表達元件的是原核載體,能在原核生物內表達。
兩者都具有的為穿梭載體。
1)真核表達載體和原核表達載體就是能在真核生物或原核生物中表達的載體,它們一般都帶有能在真核生物或原核生物中表達的必需表達元件;
2)真核表達和原核表達的目的都是為了能夠大量獲得自己所需要的目的基因的表達產物,最好有生物活性,以便下一步的實驗需要.
3)原核表達載體一般只能在原核生物中表達外源基因,但有些穿梭載體可以分別在真核和原核生物中表達它們的表達元件.
真核過表達質粒,原核過表達質粒的區別~急求~~
8樓:學雅思
一、指代不同
1、真核過表達質粒:真核細胞表達載體之一為pegfp-n1載體,具有對方面的優點。pegfp-n1載體上攜帶有egfp蛋白表達基因。
2、原核過表達質粒:能攜帶插入的外源核酸序列進入原核細胞中進行表達的載體。
二、特性不同
1、真核過表達質粒:該質粒具有很強的複製能力,可以滿足隨宿主細胞**時跟隨胞質遺傳給新生的子細胞,這是真核細胞表達載體保證目的基因穩定表達的因素之一。
2、原核過表達質粒:啟動子是dna鏈上一段能與rna聚合酶結合並起始rna合成的序列,它是基因表達不可缺少的重要調控序列。沒有啟動子,基因就不能轉錄。
由於細菌rna聚合酶不能識別真核基因的啟動子,因此原核表達載體所用的啟動子必須是原核啟動子。
三、載體構建不同
1、真核過表達質粒:,由238個氨基酸組成,分子量約為27kd。gfpgfp在包括熱、極端ph和化學變性劑等苛刻條件下都很穩定,用甲醛固定後會持續發出熒光,但在還原環境下熒光會很快熄滅。
2、原核過表達質粒:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),pcr迴圈獲得所需基因片段。
9樓:匿名使用者
質粒只是小型環狀dna分子,你指的真核、原核具體是什麼?
原核表達載體質粒有哪些,都有什麼特點?真核表達載體質粒有哪些,都有什麼特點?謝謝!
10樓:匿名使用者
。。。你這問題問的,都夠寫一套叢書了。。。
急,如何構建原核表達載體?如何構建真核表達載體?(不要具體例子) 20
11樓:匿名使用者
最簡單的就是用現有的載體就行改建,除非你自己做表達載體優化,一般實驗室都是用現成的載體,匯入目的片段那樣做得!真核表達載體就是多一個轉移片段,原理都是一樣的!
真核表達載體的特點,原核表達載體的特點
12樓:匿名使用者
原核表達一般週期短,但蛋白的活性不能確定
真核表達經過糖基化,磷酸化,和目的蛋白相似性高,週期要長,往往有的還有養細胞
真核表達載體和原核表達載體的區別
原核bai載體可以將真核基因表達,du 但是表達出zhi來的蛋白dao 是沒有活性的,因專為缺少翻譯後修飾系統屬。真核的表達載體呢由於比較大 不適合大量快copy速擴增,所以要在其載體上構建可以在原核生物如大腸桿菌中複製的所需的復知制原件 綜上 在應用的時候 要構建穿梭質粒 可以穿梭於 原核和真核 ...
急,如何構建原核表達載體?如何構建真核表達載體?(不要具體例子)
最簡單的就是用現有的載體就行改建,除非你自己做表達載體優化,一般實驗室都是用現成的載體,匯入目的片段那樣做得!真核表達載體就是多一個轉移片段,原理都是一樣的!急,如何構建原核表達載體 大體分為一下幾步 bai 1.設計目du的片段引 zhi物 含限制性酶切位點dao,要求 表達載體上有內而目的容片段...
整合載體與穿梭載體有何區別,原核表達載體和真核表達載體的區別
所謂穿梭,即即可以在真核 例如酵母 中複製,又可以在原核 例如大腸桿菌 中複製,既含有真核和原核的複製起始位點 表達質粒載體 質粒載體的意思就是以質粒作為載體 對應的是病毒載體 而表達是這個載體的主要目的是要匯入到受體細胞表達出產物 對應的是克隆載體 原核表達載體和真核表達載體的區別 一 表達載體不...