1樓:熱情小米
在反相bai
鍵合相色譜中,鍵和固定
du相的極性小與流動相的zhi極性,適用於分離非dao極性回、極性低的化合物。答
在反相鍵合相色譜法色譜柱中使用的是非極性鍵和固定相,它是將全多孔微粒矽膠載體,經酸活化處理後與含烷基鏈或苯基的矽烷化試劑反應,生成表面具有烷基的非極性固定相。目前,最常用色譜柱是採用十八烷基矽烷鍵合固定相,流動相為強極性溶劑水、甲醇、乙腈等。
高效液相流動相中甲醇乙腈與水的配比的多少有什麼區別
2樓:匿名使用者
一般對於
baic18柱,有機相比du例越大,分離效果越好,但是
zhi不是所有比例都允許用dao的,有些比例會導專致流動相極易產屬生氣泡而不能使用,所以一般不採用有機相和水相比例相近的配比。而且對於一些不溶於水的有機物,只能用高比例有機相流動相。
用高效液相色譜測杜仲含量,流動相比例為甲醇比水 25:75。結果峰分不開
3樓:千葉雅之
沒圖啥也說不清楚。到底是峰分成什麼樣子分不開呢?調一下流動相比例情況怎麼樣呢?
首先你看一下你的峰型,如果是新實驗,最好標定一下色譜柱的塔板數。有的時候色譜柱踏板坍塌,跑出的色譜峰後面總有一個肩峰,讓人誤以為是分不開。
色譜條件是流動相乙腈-水(65:35),波長254nm,流速1.0ml/min,進一針稀釋一兩千倍的甲苯。
如果你的理論板數低於5000,那板數就是非常差了。不建議做新實驗,最好是換根新柱子,或者重生一下。
如果實在是分不開,那就調整實驗方法吧。調整流動相中有機相的比例,或者調整水相加入緩衝鹽,調整ph值,更換溶劑,或者變成梯度洗脫。沒有圖譜我也沒辦法詳細解釋。
高效液相色譜儀流動相選擇應該遵循什麼樣的原則?
4樓:深水◇靜流
1.流動相的性質要求
一個理想的液相色譜流動相溶劑應具有低粘度、與檢測器相容性好、易於得到純品和低毒性等特徵。
選擇流動相時應考慮以下幾個方面:
1流動相應不改變填料的任何性質。低交聯度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機相會溶脹或收縮,從而改變色譜柱填床的性質。鹼性流動相不能用於矽膠柱系統。
酸性流動相不能用於氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統。
2純度。色譜柱的壽命與大量流動相通過有關,特別是當溶劑所含雜質在柱上積累時。
3必須與檢測器匹配。使用uv檢測器時,所用流動相在檢測波長下應沒有吸收,或吸收很小。當使用示差折光檢測器時,應選擇折光係數與樣品差別較大的溶劑作流動相,以提高靈敏度。
4粘度要低(應<2cp)。高粘度溶劑會影響溶質的擴散、傳質,降低柱效,還會使柱壓降增加,使分離時間延長。最好選擇沸點在100°C以下的流動相。
5對樣品的溶解度要適宜。如果溶解度欠佳,樣品會在柱頭沉澱,不但影響了純化分離,且會使柱子惡化。
6樣品易於**。應選用揮發性溶劑。
2.流動相的ph值
採用反相色譜法分離弱酸(3≤pka≤7)或弱鹼(7≤pka≤8)樣品時,通過調節流動相的ph值,以抑制樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,並改善峰形的技術稱為反相離子抑制技術。對於弱酸,流動相的ph值越小,組分的k值越大,當ph值遠遠小於弱酸的pka值時,弱酸主要以分子形式存在;對弱鹼,情況相反。分析弱酸樣品時,通常在流動相中加入少量弱酸,常用50mmol/l磷酸鹽緩衝液和1%醋酸溶液;分析弱鹼樣品時,通常在流動相中加入少量弱鹼,常用50mmol/l磷酸鹽緩衝液和30mmol/l三乙胺溶液。
注:流動相中加入有機胺可以減弱鹼性溶質與殘餘矽醇基的強相互作用,減輕或消除峰拖尾現象。所以在這種情況下有機胺(如三乙胺)又稱為減尾劑或除尾劑。
流動相選擇方法
1:由強到弱: 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩衝溶液)進行試驗,這樣可以很快地得到分離結果,然後根據出峰情況調整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
2: 三倍規則 :每減少10%的有機溶劑(甲醇或乙腈)的量,保留因子約增加3倍,此為三倍規則。這是一個聰明而又省力的辦法。調整的過程中,注意觀察各個峰的分離情況。
3: 粗調轉微調:當分離達到一定程度,應將有機溶劑10%的改變數調整為5%,並據此規則逐漸降低調整率,直至各組分的分離情況不再改變。
5樓:匿名使用者
有機相和非有機相,一般有乙腈+水,甲醇+水,有時候還可以有三相或四相,加酸和加鹽改善分離
正向高效液相色譜原理？反相高效液相色譜，正相分配色譜，反相分配色譜之間的關係，區別
這問題問的，太不具體了！原理一句兩句說不清，簡單的說 正相 固定相極版性大於流權動相的極性，比如固定相是矽膠柱，流動相是正己烷 反相正好相反，固定相極性小於流動相的極性，比如固定相是c18柱，流動相是甲醇 原理就是不同物質在流動相和固定相的化學作用力不同保留情況不同，因此把不同物質分開 反相高效液相...
液相色譜能測甲酸嗎,液相色譜能測甲酸嗎
酸性的hplc不能測 出峰時間太早了 鹼性的也不能用,建議用酸性hplc加正庚烷試試 今天專特意找高屬手討論了這個問題,甲酸是不能測出來的,原因是吸收太弱,即使你用254的波長也不能有理想的效果,所以測不出來 可以換其他的方法測 液相色譜的流動相中加的甲酸一定要是色譜級別的嗎 如果要求不是特別高的話...
氣相色譜法測定甲醇，乙醇，乙酸乙酯，二氯甲烷，乙腈，乙酸選什麼溶劑好
看你的試驗方法了copy。主要是在你的試驗方法下，溶劑峰和這些樣品峰能分開就可以。一般萬能的溶劑二甲基亞碸 dmso 和n,n 二甲基甲醯胺 dmf 應該都可以。這兩種物質的沸點都在一百五往上，基本可以和你的樣品分開。常見溶劑的極性大小順序 水 h2o 甲醇 meoh 乙醇 etoh 丙酮 me2c...