1樓：匿名使用者
細胞膜對外環境的物質通透性大，能吸收外界dna。製作時，不要劇烈晃動
感受態細胞有什麼特點？如何保證它的質量？
2樓：匿名使用者
感受態細胞是指容易吸收質量的細菌，通常是某種大腸桿菌。
最重要的就是要注意不能反覆凍融，要放在-80度的冰箱中儲存，使用時要在冰上緩慢融化
3樓：魯
很容易吸收周圍的dna，注意ca2+的濃度，吸收dna時要要用緩衝液
感受態細胞有哪些特點？
4樓：手機使用者
受體細胞處於感受態是轉化成功與否的關鍵之一。感受態是指細胞處於最適於攝取和容忍外來dna的生理狀態。感受態細胞特點為：
感受態細胞的製備時有什麼注意事項
5樓：天寂無痕
1、培養溫度。較低的溫度培養有利於感受態的形成，這樣可以獲得較高的感受態，但太低又不實用，因而產生了 inoue 的高效感受態製備方法，它實際是利用了所有有利於感受態的文獻而得出的一
個非常理想方法。
2、在儲存感受態時，dmso 要比甘油的效果要好，它會使感受態的效率增加。
3、液氮速凍也會使感受態的效率提高，因此推薦用液氮速凍感受態，然後儲存於超低溫冰箱內。
4、凍存的感受態用一次拿一管，不要反覆凍融。化凍之後立即使用，不要冰上放太久。
5、操作時可以輕彈輕甩，儘量避免用移液器吹吸。
6樓：y神級第六人
（1）質粒dna的質量和濃度：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
（2）感受態細胞的質量：
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的，並用最純淨的水配製，最好分裝儲存於4℃
（3）細胞的生長狀態和密度
最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接，及貯存在4℃的培養菌液。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株，od600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同）。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
（二）感受態細胞轉化中的影響：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。
各種感受態細胞的區別，用途和特徵
7樓：匿名使用者
首先，這兩種菌的基因型不一樣，這就導致了這兩種菌有不同的用途： dh5a是用於克隆的，構建質粒，建庫，保藏質粒，等等，用的是它。 bl21是專門用來表達蛋白的，如果用於儲存質粒，質粒會很不穩定。
感受態細胞的轉化要注意些什麼
8樓：匿名使用者
注意事項：
1．實驗中所需氯化鈣於冰浴後再使用
2．使用離心機前，要嚴格保證離心物品充分平衡，以免造成離心機損傷3．大腸桿菌感受態一定放冰上溶化
4．熱激和冰浴時間要科學把握
9樓：匿名使用者
此外（1）質粒dna的質量和濃度，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，則會使轉化率下降;ml左右，且注意防止被其它試劑。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同），大於30kb的重組質粒將很難進行轉化：所用的cacl2等試劑均需是最高純度的。
對tg1菌株。所有的試劑都要滅菌。對於以質粒為載體的重組分子而言：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，並經高壓滅菌處理，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。一般地。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳，所用器皿，並用最純淨的水配製，細胞密度在5×107個/：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，分子量大的轉化效率低，移液槍頭等最好是新的，不能離開冰浴，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，否則細胞轉化率將會降低，可通過測定培養液的od600控制、dna酶或雜dna所汙染，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比。密度過高或不足均會使轉化率下降。不要用已經過多次轉接。
（二）感受態細胞轉化中的影響。（2）感受態細胞的質量。整個操作均需在冰上進行，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，實驗證明，及貯存在4℃的培養菌液，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子，最好分裝儲存於4℃ （3）細胞的生長狀態和密度 最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入，od600為0．5時，如離心管
採用cohen方法制備高感受態細胞取決於哪些因素
10樓：匿名使用者
1、感受態細胞的質量，比如超級感受態比普通感受態轉化效率高很多；
2、質粒濃度及質量，連線產物因為質粒濃度低，純度低轉化效率比純的質粒低很多；
3、轉化條件，如熱激冷激的溫度時間等；
4、活化培養的條件，soc培養基優於lb培養基；
5、塗布用的培養基及抗生素濃度等。
擴充套件資料：
製作方法
cacl₂法
1、將快速生長的大腸桿菌置於經低溫（0℃）預處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時ca離子會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構，促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區域，誘導細胞成為感受態細胞
細胞膜通透性發生變化，極易與外源dna相粘附並在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣複合物。
聯合其它的二價金屬離子（如mn、co）、dmso或還原劑等物質處理細菌，則可使轉化率提高100～1000倍。
2、此時，將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動，並隨機出現許多間隙，外源dna就可能被細胞吸收。進入細胞的外源dna分子通過複製、表達，實現遺傳資訊的轉移，使受體細胞出現新的遺傳性狀。
3、將轉化後的細胞在選擇性培養基上培養，篩選出帶有外源dna分子的陽性克隆。
電轉法電擊法不需要預先誘導細菌的感受態，依靠短暫的電擊，促使dna進入細菌，轉化率最高能達到109~1010轉化子/ug閉環dna。因操作簡便，愈來愈為人們所接受
意義將構建好的載體轉入感受態細胞進行表達，不僅可以檢驗重組載體是否構建成功，最主要的是感受態細胞作為重組載體的宿主可以進行後續實驗，如蛋白質表達純化等工作。
轉化感受態細胞的目的是什麼轉化感受態細胞的前因後果
感受態細胞指的是經處理後,處於能吸收周圍環境中dna分子生理狀態的微生物細胞,在轉基因技術操作過程中要將重組dna分子匯入微生物受體細胞時就需要用感受態細胞。所謂轉化是目的基因進入受體細胞並在受體細胞中維持穩定和表達的過程。1 質粒dna的質量和濃度,環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高...
大腸桿菌感受態細胞轉化實驗正負對照
轉化a.將 70 0c下保bai存的感受態細胞 du200 l 室溫下 zhi解凍後放置於冰上。dao b.將nd pucm t質粒dna溶液 不超過50ng 或回pcr產物與pucm t質粒的答連結產物,體積不超過10 l,輕輕搖勻,冰上放置30min。c.42 0c水浴中熱擊90s或370c水浴...
BL21 DE3 pLysS感受態細胞，哪家的產品好，請詳細
bl21 de3 plyss感受態bai細胞是採用大腸du桿菌bl21 de3 plyss菌株經特殊 zhi工藝處理得到的感受dao態細胞，可用於dna 的化 版學轉化。權使用puc19 質粒檢測，轉化效率可達107，70 儲存幾個月轉化效率不發生改變。博凌科為bl21 de3 plyss感受態細胞...